怎么对PCR产物做去磷酸化

怎么对PCR产物做去磷酸化,第1张

楼主可以使用碱性磷酸酶来做,但其实很多时候去磷酸化是根本不必要的。因为很多公司在合成引物的时候,在客户没有特殊要求的时候,引物的5‘端都是去磷酸化的,一般只有用户要求的时候,才会给合成磷酸化的5‘末端。所以PCR产物的5’端也是-OH而不是-P。如果楼主你不清楚引物是否是去磷酸化的,你可以打电话去问引物合成公司,从引物合成这里去去磷酸化比用碱性磷酸酶简单。

蛋白激酶可使蛋白质磷酸化,蛋白磷酸酶使蛋白去磷酸化。

蛋白磷酸化与去磷酸化是真核细胞信号转导的共同通路,其动态变化几乎涉及从胚胎发育到个体成熟的所有过程,包括细胞的癌变和凋亡。磷酸化与去磷酸化的平衡主要由蛋白激酶(protein kinases,PK)和磷酸酶(protein phosphatases, PPs)调控。

磷酸化和去磷酸化作为分子开关,是信号转导中最简便而又十分快捷的反应方式,一般是通过磷酸化而激活,去磷酸化而失活。

大量研究结果表明蛋白质的磷酸化与去磷酸化过程在多种信号识别与转导中起重要作用,它是生物体中普遍存在的一种调节过程。蛋白激酶是一类将ATP γ位的磷酸基团转移到底物的氨基酸残基上引起靶蛋白发生磷酸化的调节酶,它通过促进功能蛋白的磷酸化而使细胞对各种刺激做出相应的反应。


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