不过模板越少，PCR效果会打折扣的。
还有，模板少，另外其它组分的用量不变的话，引物二聚体会增多，引物非特异性结合的概率会小小增高，当然，最主要的还是影PCR产量。
刚才看了，你是做RAPD，模板少的话条带会比较少的，多态性也不太容易出来，要么你再提DNA,要么你降低退火温度，提高循环数试试
模板DNA浓度主要看你的PCR扩增体系所使用的酶：
1、一般普通的酶，DNA模板量在50到100ng都可以扩增出来的
2、高效一点的酶，几ng也可以扩增出来的。
1、PCR反应步骤：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成
2、PCR反应五要素：①引物（Primer）、②酶 （Taq DNA Polymerase） 、③dNTP（dATP, dGTP, dCTP, dTTP）、④模板（Template）、⑤Mg2+（Magnesium）
3、引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
4、酶及其浓度：目前有两种Taq DNA聚合酶供应，一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。
5、模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是： 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀； 蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。
6、PCR扩增条件包括温度、时间和循环次数。
要看用的是什么模板了，pcr的灵敏度很高，几pg的DNA就能检测出来，一般用pcr产物或者质粒做模板，只需要1ng左右就可以，如果是基因组或者cDNA做模板，模板量可适当增加。PCR指聚合酶链式反应，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。
欢迎分享，转载请注明来源：优选云
微信扫一扫
支付宝扫一扫
