因为跑50kDa以上的蛋白要用10%的。50kDa-15kDa左右的话用15%的,跑更小的蛋白(比如10左右或以下的),就要适当的把胶的浓度再提高,18%或20%都可以。所以26kd蛋白用15%的胶.
如果以溴酚蓝跑到胶的底部为准,26kD在10%的由下往上1/4的地方,而15%就在由下往上大约1/2(不太确定)的地方,对于分子量比较小的蛋白,当然是胶的浓度越大,分离效果越好.但是你必须考虑到,胶的孔径一旦小于蛋白-SDS复合体的直径,分子量大于这个蛋白的所有蛋白仍然不能有好的分离效果.如果孔径太大,所有蛋白都跑得那么快,也是分不开的.
分子量小用30到50KD浓度的胶。胶浓度要配制的稀一些,一般选择3%到10%的凝胶增加转膜时间,分子量较大的蛋白要完全转到膜上需要更长的时间。
在不同浓度的胶中的速度差要尽可能达到最大,假设是对数正态分布,那么方差要足够大,才会有较好的分离效果,另一方面,蛋白跑的路程越大,也越能和附近的蛋白分开.建议是溴酚蓝跑到底。
明胶用途
明胶是一种大分子的亲水胶体,是胶原部分水解后的产物。按其性能和用途可分为照相明胶、食用明胶和工业明胶。根据用途不同,对明胶的质量要求也不一样。用作粘结剂使用时,主要要求粘接强度。用于照相、食品、医药等领域时,则强调产品的纯度。
胶原分子是由三条多肽链相互缠绕所形成的螺旋体,通过工艺过程的处理,胶原分子螺旋体变性分解成单条多肽链α链的α组分和由两条α链组成的β组分及由三条α链组成的γ组分,以及介于其间和小于α组分或大于γ组分的分子链碎片。
由此可见,明胶是一个具有一定分子量分布的多分散体系,其分子量分布因工艺条件不同而有所差别,并影响到明胶的理化性能。
欢迎分享,转载请注明来源:优选云