已完成纯化的蛋白如何保存

已完成纯化的蛋白如何保存,第1张

保存方法如下:

1.以沉淀形式保存在高浓度的硫酸铵中。

2.添加50%甘油冷冻,尤其适用于酶类。

3.如果样品要用于生物学检测,避免使用防腐剂。在体内实验中不能添加防腐剂,而应当将样品分装成小份冷冻。

4.可使用无菌滤器以延长保存时间。

5.添加稳定剂,如甘油(5-20%)、血清白蛋白(10mg/ml)、配基(浓度取决于活性蛋白的浓度)以帮助维持生物活性。

6.避免反复冻融或冻干重溶解过程,这样很可能会降低生物活性。

7.一些冷沉淀蛋白会在4度沉淀出来,包括一些小鼠IgG3亚族的抗体,不能保存在4度冰箱中,可添加防腐剂保存在室温中。

V/V就是volume per volume,容积比例

例如100ML溶液,50ML为甘油

用100ml水和100ml的丙三醇混合配置的然后高压灭菌1:1(v/v)

pro在缓冲溶液里放入-20或-80保存,但是蛋白质溶液最好不要保存,现配现用,因为蛋白质溶液的保存期限不长,如果变质影响实验效果

你好,蛋白保存是个比较棘手的问题,就我的理解来讲:

1.

蛋白的保存很大程度上依赖于蛋白本身的结构稳定性,其次和保存条件优化有关;

2.

尽量避免蛋白的反复冻融,这会对蛋白的结构和活性造成破坏;

像你说到的第二天就要用,根本没必要放在-70℃低温,一般来讲,尽量安排好实验周期,在3天内用完蛋白(4℃保存)是理想条件;

3.

如果不得不保存,要分装,留下马上就用的放在4℃,其他放低温,每次取1只;如果有冻干机,冻成干粉再放到-70比液态低温更好,再溶解也会好很多(但很多蛋白还是会有失活问题);

4.

关于保护剂,如果蛋白稳定性不强,一般会加甘油(5%-50%浓度)和叠氮钠(抑菌),这样一来,取出时,不得不做透析或脱盐,以去除甘油和叠氮钠,会带来损失,相比而言,冻干粉就好很多;

5.

关于咪唑的去除问题,如果确信咪唑的存在对你后续的实验没影响,可以不去;但实际上,很多实验都会受到咪唑的影响,或者说一旦实验有疑问,你就无法判定是否是因为咪唑,所以建议你去咪唑,去咪唑的方式包括:透析、浓缩管离心、脱盐柱。个人认为,去除效率、最省时、蛋白回收率最高的办法是脱盐柱。

我目前想到的就这么多,欢迎继续讨论,祝实验顺利!


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