提取蛋白质或酶的时候，为什么要在低温条件下操作

蛋白质提取方法-------列举10种方法一、植物组织蛋白质提取方法(summer)1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl(PH8)45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法(summer)三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml)，使用前再加入1M的DTT65ul/ml。这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜(newinbio)目的：WESTERNBLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量)倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：(2ml每1mlTRIPURE用量)振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存(或可直接用于WESTERNBLOT)存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2XBUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。四、lysissolution:(yog)Proteinextractionbuffer(Camiolobuffer):100ml=(0.075MPotassiumAcetate)0.736g(0.3M)NaCl1.753g(0.1M)L-argininebasicsalt1.742g(0.01M)EDTA-HCl0.292g(0.25%)TritonX-100250.ulupto100mlwithdH20.pH7.4.Then0.2umfilter.1.Freezetissueinliquidnitrogen.2.RinseinPBSthenmince.3.Add1mlCamioloextractionbufferper100mgoftissue.4.Homogenizefor1minuteat4\\'C.5.Spinat3,000.rpm/15minutes/4\\'C.6.Removesupernatantandsaveinanothertube.7.Ifnecessary,dializethesupernatantagainstPBSwith50mM/LTris-HClpH7.4.五、植物材料：水稻苗，叶鞘，根(ynibcas)1、200毫克样品置于冰上磨碎2、加lysisbuffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清3、重复离心5minlysisbuffer：ureanp-40ampholine2-mepvp-40六、蛋白质样品制备(sigma)秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等(1986)的方法进行。100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5ml10%三氯乙酸(丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇)，混匀，-20℃沉淀1小时，4℃，15000r/min离心15min，弃上清，沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清，(有必要再用80％丙酮(含10mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。按每mg干粉加入20μl(可调)UKS液[9.5M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2%Ampholine(AmershamPharmaciaBiotechInc，pH3.5-10)，6%TritonX-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度(温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰)16000r/min离心15min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳。或者-70度保存七、植物根中蛋白质的抽取(phenol)(1)sample,液氮研磨(2)装1.5mlcentrifuge用tube(3)加1MKH2PO4+K2HPO4700ul(4)12000rpm,4度,10-15minite(5)取上层液，蛋白质就在里面八、SDSextractionfollowedbyacetoneprecipitation–simpleextractionprotocolthatdoesnotrequirephenol.Recommendedstartprotocolforwholetissueextractions.(hgp)1.Grind1goffreshtissuetoapowderwithliquidnitrogeninamortarandpestle.2.Add5mLofextractionmedia(0.175MTris-HCl,pH8.8,5%SDS,15%glycerol,0.3MDTT)directlytomortarandcontinuegrindingforanadditional30sec.3.Filterhomogenatethroughtwolayersofmiraclothintoa50mLFalcontubeatroomtemperature.4.Immediatelyadd4volumesoficecold100%acetonetofilteredhomogenate,mixbyvortexingandplaceat-20Cforatleastonehourtoprecipitateproteins.5.Centrifugeat5000gfor15mintocollectprecipitatedprotein,decantsupernatant.6.GentlyblotresidualacetonefromcontainerwithKimwipeandthenwashpelletin15-20mLofcold80%acetone.Besuretothoroughlybreak-uppelletbypipetting,vortexingorsonication.7.Repeatsteps5and6.8.Collectfinalproteinprecipitatebycentrifugationat5000gfor15minanddrypelletbyinvertingonKimwipefor15minat37C.9.Resuspendfinalpelletin0.5-1mLofIEFextractionsolution(8Murea,2Mthiourea,2%CHAPS,2%TritonX-100,50mMDTT,0.2%pH3-10ampholytes)bypipettingandvortexingat25-30C.Incubatesamplefor1hatroomtemperaturewithagitation.Donotheatsampleunderanycircumstancesasthiswillleadtocarbamylationofproteins.10.Centrifugefor10minat12000gandusesupernatanttorehydrateIPGstrips.11.Ifproteinquantitationisnecessary,precipitateproteinsamplewithTCAoracetonepriortoperformingBradfordorLowryassayasdetergentsandreducingagentsinterferewiththeseassays.Phenolextractionfollowedbymethanolicammoniumacetateprecipitation–aneffectiveprotocolforsamplepreparationfromprotein-poor,recalcitranttissuessuchasplants(seeHurkmanandTanaka,1986,PlantPhysiology81:802-80九、材料：细菌蛋白(puc18)用甲醇提取的，冻干后用缓冲液溶解的。样品缓冲液是一般的。其中含又2%的SDS，20mmol的2-巯基乙醇。十、线粒体蛋白的提取(bioon)IsolationforMitochondriaModificationbyBioonMaterialsandreagents:homogenizingbuffer:100mMmannitol10mMTris-HClbuffer(pH7.5)5mMMgCl2关于蛋白质1mMEGTA1mMDTTleupeptin(0.1ug/ml)0.1MNa2CO3Methods:-10*6Cellswerewashedwithice-coldPBSandlysedbyhomogenizingin1mlbuffer(ice-cold)containing100mMmannitol,10mMTris,5mMMgCl2,1mMEGTA,1mMDTT,leupeptin(0.1ug/ml)-SubjectedtoPolytronhomogenizationforthree-fourburstsof3-10seachatasettingof6.5.-Intactcellsandnucleiwereseparatedbycentrifugationat120gfor5minat4℃-Supernatantswerecentrifugedat10,000gfor10mintocollecttheheavy(mitochondrial)membranepellet.-Cytoplasmicfractionswereobtainedbycentrifugingsupernatantsat100,000gfor30min.-Resuspendedpelletto0.25mg/mlinfreshpreparationof0.1MNa2CO3(pH11.5)-Incubatedonicefor30min.-Ultracentrifugationat100000gfor1hat4℃toprecipitatethemitochondriamembraneprotein.Andthesupernatantsaremitochondrialmatrix.0.5mgofproteinsinmitochondriacanget100ugofproteins(thealkali-resistantfractions)Ref.:PNAS,2002，99：12825–12830本方法只适用于提大鼠细胞线粒体蛋白，而不适用于线粒体功能检测

comic strips

n.连环漫画，连环图画( comic strip的名词复数 )

例句:

1.

Regularly read humorous comic strips and look for quips and funny comments in yourreading.

经常读些漫画，阅读的时候多找找有趣的评论和俏皮话。

2.

But the character created by sir conan doyle had an undoubted charm on the public: firstwith novels by the british author, then with the numerous theatre and cinemadramatizations, not to mention comic strips, videogames and cartoons.

但是由柯南道尔创造的角色在公众心中有毋庸怀疑的魅力：首先作品是由英国作家创作，并且后来有数不清的戏剧或影视改编，更不用提连载漫画，电子游戏和卡通剧了

假货口红里面含铅量很大，又没通过质检，你永远不知道它是在什么样的环境下制造出来的，就像你永远不知道你的外卖是在什么样的厨房里加工好的，使用了什么样的食材，菜有没有洗过一样。

我们来看看正品口红与假货的区别吧。

乍一看没什么毛病。

拿在手上的重量也差不多，假货也沉甸甸的，说是铝壳。以前是假货比正品摸起来要稍微轻一点，质感没有那么好，现在假货也升级了，更难辨认。

盒子上几乎都是英文，大部分都看不懂。看不懂没关系，会辨认就可以了。

不过口红本身区别还是有的，因为假货细节方面不会有那么精致。

我们先来看看口红外包装盒子的对比吧。

有的口红盒子上会印有钢印，这个不是每一支口红盒子上都有，具体要看口红是哪一个版本的，有比利时版本和加拿大版本，外包装和标签都有区别，具体的我会在后面给大家介绍的。

可以放在灯光下对比一下它们的反光程度，白天找一个亮点的地方就行。正品的纸盒子应该会稍微硬一点，没有那么容易变形，假货的盒子就是软趴趴的，这个可以通过手感

一下。

我们来看一下外壳，首先，正品口红的外壳是纯黑色，稍微有一点点泛灰，假货则是稍微偏灰一点的颜色，要么就是全黑，正品的logo字体摸上去会有点有凹凸的质感，字体较粗。

假货的外壳有点偏深灰，但是现在有些假货做的也很接近正品颜色了，这个就感觉更难辩别了，不过可以观察一下logo，假货像是印上去的，使劲儿抠一下是可以抠掉的，正品不会。

而且正品mac口红的外壳用了一种特殊的lasermill技术把闪粉嵌入黑灰色的涂料里，这个假货是无法做到的。

注意观察正品的涂料里闪粉不多不少刚刚好，看起来也比较均匀，而仿品涂料里的闪粉会做的很密集或是很不明显，甚至会有些地方没有闪粉。

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