考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质染料结合的原理,定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。
考马斯亮蓝(CoomassieBrilliantBlue)法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的原理,定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰(lmax)的位置,由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现,染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。
考马斯亮蓝染色法的突出优点是:
灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。
测定快速、简便,只需加一种试剂。完成一个样品的测定,只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。
正常,人体正常生理情况下也会有这种现象。因为蛋白也分很多种,按大小分:大分子。。,小分子。。!尿检化验单是分析接受尿常规检查者的身体状况的重要依据。以下以表格来说明各指标的意义:
名称
正常
异常
酸碱度(pH)
4.6~8.0(平均值6.0)
增高常见于频繁呕吐、呼吸性碱中毒等
酸碱度(pH)
4.6~8.0(平均值6.0)
降低常见于酸中毒、慢性肾小球肾炎、糖尿病等
尿比重(SG)
1.015~1.025
增高多见于高热、心功能不全、糖尿病等
尿比重(SG)
1.015~1.025
降低多见于慢性肾小球肾炎和肾盂肾炎等
尿胆原(URO)
<16
超过此数值,说明有黄疸
隐血(BLO)
阴性(-)
阳性(+)同时有蛋白者,要考虑肾脏病和出血
白细胞(WBC)
阴性(-)
超过五个,说明尿路感染
尿蛋白(PRO)
阴性或仅有微量
阳性提示可能有急性肾小球肾炎、糖尿病肾性病变
尿糖(GLU)
阴性(-)
阳性提示可能有糖尿病、甲亢、肢端肥大症等
胆红素(BIL)
阴性(-)
阳性提示可能肝细胞性或阻塞性黄疸
酮体(KET)
阴性(-)
阳性提示可能酸中毒、糖尿病、呕吐、腹泻
尿红细胞(RBC)
阴性(-)
阳性提示可能泌尿道肿瘤、肾炎尿路感染等
尿液颜色(GOL)
浅黄色至深黄色
黄绿色、尿浑浊、血红色等就说明有问题
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