pcr产物凝胶电泳后为阳性,还需要进一步测序确定吗

pcr产物凝胶电泳后为阳性,还需要进一步测序确定吗,第1张

pcr产物凝胶电泳后为阳性,还需要进一步测序确定吗,可以在PCR完之后进行测序分析,之后再酶切连接转化,但是后面最好还是将克隆进行一下鉴定,但这样的话正确的概率会很高。但一般都是在转化后进行菌落PCR或质粒小抽再进行PCR鉴定或酶切鉴定后,送样品测序。

样品看着有拖尾,marker还是基本正常的,说明涂抹状带不是电泳引起的,这表明PCR的特异性不好,而是PCR本身有问题。

出现拖尾,基本原因有2个:

模板量过高,

镁离子浓度过高;

至于你另一组引物没p出来,一般来讲,只要引物设计没严重问题,常规pcr不会完全没带,顶多就是有杂带。建议:

1. 检查引物设计,是不是反了;

2. 检查模板是否降解?最简单的办法是,实验中设计阳性对照;

3.如果模板没降解,对模板设梯度再p、


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