[目的] 熟悉蛙 (或蟾蜍) 的坐骨神经腓肠肌标本的制备方法，初步掌握几项基本实验操作。
[原理] 蛙类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相类似，而其组织在离体状态下，易于控制和掌握，所以蛙类的神经一肌肉标本常用以研究兴奋性、兴奋过程、刺激的一些规律和特性。
[实验动物] 蛙 (或蟾蜍)
[器材及药品] 解剖器械，锌铜弓，培养皿，烧杯，任氏液，棉花，线。[方法及步骤]
1．破坏脑脊髓：取蛙或蟾蜍一只，用蛙针从枕骨大孔垂直插入，向前伸人颅腔，捣毁脑髓；向后插入椎管，捣毁脊髓。如果蛙处于瘫痪状态，表示脑和脊髓完全破坏。然后沿两侧腹部将蛙横断为上下两半。并将前半段弃去，保留后半段备用。
2．剥离皮肤：先剪去尾椎末端及泄殖腔附近的皮肤， 然后从脊柱的断端撕下皮肤，将其全部剥去，直至趾端。除去内脏，将标本放在滴有任氏液的蛙玻璃板上。将手及使用过的解剖器械洗净。
3．分离标本为两部分：沿脊柱正中线将标本匀称地剪成左右两半，一半浸入盛有任氏液的烧杯中备用，另一半作进一步剥制。
4．分离坐骨神经：在大腿背侧的半膜肌与股二头肌之间用玻璃分针分离出坐骨神经。注意：分离时要仔细用剪刀剪断坐骨神经的分支，向上分离至基部，向下分离到腘窝。保留与坐骨神经相连的一小块脊柱，将分离出来的坐骨神经搭于腓肠肌上；去除膝关节周围以上的全部大腿肌肉，刮净股骨上附着的肌肉，保留的部分就是坐骨神经及股骨。
5．分离腓肠肌：在跟键上扎一线，提起结线，剪断结线后的跟腱，腓肠肌即可分离出来。此时在膝关节下方将其他所有组织全部剪去，到此为止，带有股骨的坐骨神经腓肠肌标本制备完成。
6.标本的检验：将坐骨神经腓肠肌标本放置在蛙玻璃板上，用锌铜弓刺激坐骨神经，若腓肠肌迅速发生收缩反应，说明标本机能良好，制备成功。应及时移放入盛有任氏液的培养皿中，供实验之用。
[注意事项]
1． 剥制标本时，切忌用金属器械牵拉或触碰神经干。
2. 分离肌肉时应按层次剪切。分离神经时，必须将周围的结缔组织剥离干净。
3. 制备标本过程中，应随时用任氏液浸湿神经和肌肉，防止干燥。
4. 切勿让蟾蜍的皮肤分泌物和血液等沾污神经和肌肉，也不能用水冲洗，否则会影响神经肌肉的功能。
实验二 生物电现象的观察
[目的] 通过实验证明生物电现象的存在。
[原理] 电流的刺激作用于神经肌肉标本，由于产生生物电流，因而引起肌肉的收缩。而神经肌肉标本在损伤时或正在兴奋时，都有电位的改变，所以可把神经肌肉标本的神经放在组织损伤部与正常部之间，或放在正在兴奋的组织上，也能引起肌肉的收缩，从而证明损伤电位和动作电位的存在。
[实验动物] 蛙或蟾蜍
[器材及药品] 解剖器械，锌铜弓，玻璃针，任氏液
[方法与步骤]
一、实验准备操作 把先作好两个神经肌肉标本用锌铜弓检查标本是否正常。
二、实验项目
1． 将一个神经肌肉标本的神经的一点轻置于臀部肌肉的损伤部，另一点置于正常部，观察在接触时是否引起肌肉的收缩？
2． 将甲标本的神经放在乙标本的肌肉上，再用锌铜弓刺激乙标本的神经，观察是否引起乙标本的肌肉收缩。
[注意事项] 要求神经肌肉标本保持高度的兴奋性；标本制作好后应立即进行实验。
[实验结果]蛙坐骨神经标本用锌铜弓刺激后肌肉收缩。
实验二 生物电现象的观察
[目的] 通过实验证明生物电现象的存在。
[原理] 电流的刺激作用于神经肌肉标本，由于产生生物电流，因而引起肌肉的收缩。而神经肌肉标本在损伤时或正在兴奋时，都有电位的改变，所以可把神经肌肉标本的神经放在组织损伤部与正常部之间，或放在正在兴奋的组织上，也能引起肌肉的收缩，从而证明损伤电位和动作电位的存在。
[实验动物] 蛙或蟾蜍
[器材及药品] 解剖器械，锌铜弓，玻璃针，任氏液
[方法与步骤]
一、实验准备操作 把先作好两个神经肌肉标本用锌铜弓检查标本是否正常。
二、实验项目
1． 将一个神经肌肉标本的神经的一点轻置于臀部肌肉的损伤部，另一点置于正常部，观察在接触时是否引起肌肉的收缩？
2． 将甲标本的神经放在乙标本的肌肉上，再用锌铜弓刺激乙标本的神经，观察是否引起乙标本的肌肉收缩。
[注意事项] 要求神经肌肉标本保持高度的兴奋性；标本制作好后应立即进行实验。
[实验结果]蛙坐骨神经标本用锌铜弓刺激后肌肉收缩。
锌铜弓是检验标本机能活性最常用而简易的刺激器。原理是：金属与溶液之间产生电位差，即电极电位。通常将金属浸入电解质溶液中，如Zn便溶解而成Zn离子。而在Zn的里面则形成负离子。Cu在溶液中则相反，金属与溶液之间便产生了电位差——电极电位。如果将Zn和Cu一端接触，则在接触部位电流由Cu向Zn方向流动；而在溶液中则相反，由Zn向Cu流动。当锌铜弓接触组织时（注意：表面必须湿润），电流便沿Zn→可兴奋组织→Cu方向流动，而产生流动作用。这样，锌铜弓好像一个电池，Zn如同其阳极，Cu好像阴极而发挥作用。神经或肌肉的电刺激阈值非常小，所以仅用锌铜弓接触，即可构成刺激，以便检验组织的机能活性。
破坏蟾蜍的脑和脊髓1
从箱子里取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握蟾蜍，用食指按压其头部使其尽量前俯，右手用大头针自枕骨大穴垂直插入，向前刺入颅腔，左右搅动，毁坏其脑组织；将探针回撤向后刺入脊椎管，反复提插毁其脊髓。如果蟾蜍四肢酸软，呼吸消失，说明其脑和脊髓被破坏的差不多，否则继续上述方法进行。
END
剪除蟾蜍的躯干上部和其内脏
1
沿着蟾蜍的上肢处将蟾蜍的头部剪去，继而沿脊柱两侧剪开腹壁，这时的内脏全部下垂，减除内脏。此时，你可以在脊柱的两旁看见坐骨神经，注意剪除的过程中不要损伤坐骨神经！
END
剥皮
1
用镊子夹紧脊柱的断端，右手捏住蟾蜍的皮肤边缘，逐步向下剥离皮肤，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。
END
制备坐骨神经的小腿标本
1
用粗剪刀沿中线将脊柱剪成左右两半，从耻骨联合处剪开两侧的大腿，在这期间，注意不要损伤了坐骨神经。将分离的标本放到盛有任氏液的培养皿中。
2
取一侧的下肢用大头针固定在蛙板上，用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经，于近脊柱侧结扎。再循着坐股神经沟分离暴露出坐骨神经的大腿部分，直至胫腓神经分叉处。自上向下剪断所有坐骨神经的分支，游离出坐骨神经。
3
将游离的坐骨神经搭于腓肠肌上，自膝关节周围向上剪除所有的大腿肌肉，在股骨的中部剪去上段股骨，保留部分即为坐骨神经小腿标本。
步骤阅读
END
完成坐骨神经-腓肠肌标本
1
将上面所做的标本在跟腱处结扎后剪断，并逐步游离腓肠肌至膝关节处，将小腿的其余部分全部剪掉，这样就制成了坐骨神经-腓肠肌标本。
END
检查兴奋性
1
用沾上任氏液的锌铜弓迅速接触坐骨神经，如腓肠肌发生收缩，则表明标本具有正常的兴奋性，说明制备成功。
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