做实时定量pcr需要哪些试剂?

做实时定量pcr需要哪些试剂?,第1张

如果你想做荧光定量pcr的根据实验思路来说应该需要一下试剂和仪器

1.模板提取(一般为rna):trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、depc处理水

2.模板浓度测定:分光光度计或nanodrop

3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通pcr做,也可以用水域做。

4.荧光定量pcr试剂:通常有用sybr

green

mix做的,但是这里建议你用evagreen做,灵敏度和平行性都要好于sybr

green,并且如果你那是abi或者stratagene的pcr如果用sybr

green还需要加一步rox很麻烦。

5.其他:除了以上的那些还需要离心管、pcr管或板(axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。

1、斐林试剂

作用:鉴定还原性糖:C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。

还原性糖与斐林试剂发生作用,生成砖红色沉淀。如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。

2、班氏尿糖定性试剂

使用方法同斐林试剂,所不同的是班氏试剂可长期使用。

3、双缩脲试剂

作用:鉴定蛋白质,蛋白质与双缩脲试剂发生作用,可产生紫色反应。也可用于鉴定多肽。

4、苏丹Ⅲ

作用:鉴定脂肪,脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色(或被苏丹Ⅳ染成红色)。

5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液

作用:用于洋葱根尖的解离,即使组织中的细胞相互分离开来。能杀死细胞固定。

6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液(或醋酸洋红溶液)

作用:使细胞核内的染色体着色,便于观察。

7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液

作用:观察成熟植物细胞质分离时用。经此处理细胞仍具活性。

8、质量浓度为0.1mg/ml的亚甲基蓝溶液

作用:(1)用于观察根对矿质元素离子的交换吸附观察;

(2)用于检测水中细菌情况,根据亚甲基蓝褪色情况,判断水质被细菌污染情况。

是活体染色剂。

9、丙酮

是有机溶剂,在叶绿体中色素提取时,用于溶解叶绿体中的色素。可用酒精替代,不过提取色素时将绿叶放入酒精中隔水加热

10、层析

是一种脂溶性很强的有机溶剂,叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同:溶解度高的随层析液在滤纸上扩散很快;溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。

代用品:93号汽油、四氯化碳

11、SiO2、CaCO3

作用:加入少许SiO2是为了研磨得充分;加入少许CaCO3是为了防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。

12、碘液

作用:用来测定淀粉,淀粉遇碘后,形成紫色的复合物。

13、二苯胺

作用:DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色。

14、NaOH

作用:用于吸收CO2(验证光合作用需要CO2)或改变溶液的pH,

15、Ca(OH)2

作用:鉴定CO2(验证呼吸作用产生CO2)。

16、NaHCO3

作用:提供CO2等。


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