Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。
革兰染色不可以用于真菌：
因为革兰氏染色是细胞壁染色，其原理是基于G+菌和G-菌的细胞壁结构的差异而导致染色结果的差异，从而将其两者区分的。霉菌的结构与真菌显著不同，因此不能利用该方法。
细菌的细胞壁主要是肽聚糖 ，G+皮厚，不易脱色，G-皮薄易被复染。。而真菌的细胞壁的主要成分是几丁质，初染之后不易被洗脱，所以真菌染色后镜检，全是紫的。
革兰氏染色：
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
能染上蓝紫色的是阳性菌，因为细胞壁厚，染不上的复染被染成红色的，是阴性菌，因为细胞壁薄。主要用于分析致病菌等的类型，用于辅助诊断，看用什么药，或者抗生素合适！
革兰氏阳性菌能产生外毒素，革兰氏阴性菌能产生内毒素，两者的致病作用不同
金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、碳疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌。百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性。
其染色的关键我觉得首先固定这一步最重要。不能滴片子滴太厚了，固定时用火烤也要掌握火候。
此外就是脱色的时候多脱一会儿，到没有紫色出来后在脱上10几秒，不然有假阳性！
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