酶分离纯化过程中需要注意什么问题

酶分离纯化过程中需要注意什么问题,第1张

(1)要注意防止酶的变性失活.

(2)酶的分离纯化的目的是将酶以外的所有杂质尽可能的除去,因此,在不破坏所需酶的条件下,可使用各种“激烈”的手段。此外,由于酶和它的底物、抑制剂等具有亲和性,当这些物质存在时.酶的理化性质和稳定性发生了一定变化,从而提供了更多条件和方法可供采用。

(3)酶具有催化活性。检测酶活性,跟踪酶的来龙去脉,为选择适当方法和条件提供 直接依据。在工作过程中,从原料开始每步都必须检测酶活性.一个好的方法和措施会使酶的纯度提高倍数大,活力回收高,同时重复性好。

首先要根据你要提取的酶的活性来,要选择最适合的提取条件,比如提取液的ph,温度,,如果你是搅拌提取,搅拌的速度也是一个关键,如果是从动物体内提取酶,所用的材料不能是放置过久的,越新鲜酶的活性越高,一般提取的酶液杂质都非常多,可以利用一些分离纯化的手段,例如,盐析,有机溶剂沉淀,超滤,以及膜分离,亲和层析

酶活性很不稳定,在提取过程中,低温是必须,而且试验速度要快

数:251

酶提取法

天然植物的细胞壁由纤维素构成,其中植物的有效成分往往被包裹在细胞壁内。酶提取法就是利用纤维素酶果胶酶蛋白酶等(主要是纤维素酶),破坏植物的细胞壁,以促使植物有效成分最大限度溶解分离出的一种方法。在酶提取法的提取工艺中,酶的选择、酶浓度、pH值、酶解温度、酶解时间都会影响植物提取物的提取率。

E. BARZANA等人采用酶提取法从万寿菊提取类胡萝卜素,主要研究了料液比、酶浓度、酶解时间和温度等对提取率的影响,研究结果表明最佳提取工艺为:料液比1∶4、酶浓度0.3%、提取时间为1.5h、温度为25℃。张小清等人采用酶提取法提取银杏中的活性成分—黄酮,并通过正交实验找出酶浓度、pH值、酶解温度和时间等影响提取率的最佳工艺条件。(一)水溶液提取法(二)有机溶剂提取法

提取工艺的好坏可以影响到酶活性的高低,不过最主要的因素是该工艺的吐酶量。如果是细菌发酵,就看细菌繁殖数量和定向吐酶量。如果是基因重组技术,就看反应器的档次。

高档次的动物反应器好比德国奔驰,车子又快又稳,单位时间的运载量(产酶量)一定最高。反之,那些细菌类反应器在单位时间的产酶量会很低。

所以,决定纳豆激酶酶活性高低的关键因素是制酶工艺的先进性。


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