pcr导流杂交法准确吗

pcr导流杂交法准确吗,第1张

pcr导流杂交法不准确。PCR只能检测出alpha地贫中的缺失型,反向斑点杂交需要两次检测才能完整的检出alpha、Beta-地贫。导流杂交技术不能做到基因位点的准确分型。而测序方法需要昂贵的仪器,复杂序列分析,人工经验要求高,不利于大规模筛查。

诊断分析:

一、厘清分子诊断细分赛道

分子诊断通俗点讲就是通过检测DNA(遗传)信息来做出诊断,再根据方法学的不同分成荧光PCR、FISH、基因芯片和基因测序4类,这是目前行业比较流行的分法。将分子诊断的分类做了简化(见表一),把前三种技术归为一类(简称PCR检测,虽然这个叫法在科学上不太准确),然后基因测序单独成一条赛道。

图一 分子诊断赛道分类

这么简化分类的好处是,我们可以比较直观的判断一家分子诊断公司所做的产品和其所处的赛道。如公司拥有两大技术平台:荧光PCR和导流杂交。其中荧光PCR是通用平台技术,而导流杂交属于公司特色技术,仔细看技术步骤可以发现,这两种技术平台的前两步是相似的,都是先提取扩增DNA,差异只在最后一步,其实导流杂交接近于基因芯片的概念。所以很显然,PCR检测的赛道,和基因测序完全不沾边。再看看它的产品(图三),对于所谓的“PCR+导流杂交法”和“PCR+低密度基因芯片+导流杂交技术”,这些术语都可以归到第一类(PCR检测),这样我们判断起来就会清晰一些。需要说明的一点是关于导流杂交的定性和荧光PCR的定量,初看起来似乎定性比较弱,但实际上很多场景的核酸检测目标只需定性,定量缺乏诊断意义。比如HPV检测,由于HPV病毒数量和宫颈癌风险尚无明确的相关性,所以定量检测没有太大意义,而对于HPV分型检测,通量高的导流杂交技术反而更有优势。

凯普导流杂交实验顺序分两步。

1、准备好冰盒,将PCR95℃变性的产物放入冰盒中至少2min。

2、将杂交仪温度设定为45℃,加杂交液800ul,进行预杂交,2min,使杂交膜进入最佳反应状态。


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