采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂；
反相色谱法
一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液水互溶的有机溶剂。
反相流出顺序：极性大的先流出，极性小的后出。
反相高效液相色谱的固定相是非极性溶剂，常见的固定相是十八烷基键合硅胶，流动相是极性溶剂，常见的流动相是甲醇，乙腈。
反相高效液相色谱是由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，它正好与由极性固定相和弱极性流动相所组成的液相色谱体系（正相色谱）相反。
RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基键合硅胶，典型的流动相是甲醇和乙腈。RP-HPLC是当今液相色谱的最主要的分离模式，几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物的分离。 反相色谱法适于分离非极性、极性或离子型化合物，大部分的分析任务皆由反相色谱法完成。
扩展资料
反相高效液相色谱的原理：
在反相键合相色谱法中使用的是非极性键合固定相。它是将全多孔(或薄壳)微粒硅胶载体，经酸活化处理后与含轻基链(c4、C8、C18)或苯基的硅烷化试剂反应，生成表面具有烷基或苯基的非极性固定相。如共价结合到载体上的直链碳氢化合物正辛基等。
关于反相色谱的分离机理，吸附色谱的作用机制认为溶质在固定相上的保留主要是疏水作用，在高效液相色谱中又被称为疏溶剂作用。根据疏溶剂理论，当溶质分子进入极性流动相后，即占据流动相中相应的空间，而排挤一部分溶剂分子。
当溶质分子被流动相推动与固定相接触时，溶质分子的非极性部分或非极性因子会将非极性固定相上附着的溶剂膜排挤开，而直接与非极性固定相上的烷基官能团相结合(吸附)形成缔合络合物，构成单分子吸附层。
这种疏溶剂的吸附作用是可逆的，当流动相极性减少时，这种疏溶剂斥力下降，会发生解缔，并将溶质分子解放而被洗脱下来。
参考资料来源：百度百科-反相高效液相色谱
液相色谱分为正相色谱和反相色谱。正相色谱的固定相极性大于流动相极性，而反相色谱的固定相极性小于流动相，固定相常采用C8和C18柱，流动相采用极性溶剂乙腈或甲醇，一般适用于分离极性较小的样品。欢迎分享，转载请注明来源：优选云
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