酚氯仿抽提DNA体系后出现的现象及成因,沉淀DNA时为什么要用无水乙醇

酚氯仿抽提DNA体系后出现的现象及成因,沉淀DNA时为什么要用无水乙醇,第1张

氯仿抽提DNA后,会使溶液分层,上层为水相,含有DNA;中间为蛋白(有时看不到);下层为有机相.

原因是酚氯仿可以使蛋白质变性,从而从溶液中析出,但是蛋白密度会小于酚氯仿,所以离心后它分布在中间;而DNA溶于水而不溶于有机相.

沉淀DNA用无水乙醇,是因为DNA不溶于乙醇,而乙醇可以夺取水,从而使得DNA聚集沉淀,如果用乙醇沉淀的话一定要用2倍以上的无水乙醇.也可以用异丙醇沉淀.

氯仿的用途是有机合成原料,主要用来生产氟里昂、染料和药物,在医学上,常用作麻醉剂。可用作抗生素、香料、油脂、树脂、橡胶的溶剂和萃取剂。与四氯化碳混合可制成不冻的防火液体。

还用于烟雾剂的发射药、谷物的熏蒸剂和校准温度的标准液。工业产品通常加有少量乙醇,使生成的光气与乙醇作用生成无毒的碳酸二乙酯。使用工业品前可加入少量浓硫酸振摇后水洗,经氯化钙或碳酸钾干燥,即可得不含乙醇的氯仿。

氯仿的化学反应

三氯甲烷由于三个氯原子的诱导效应,化学性质活泼。易水解,生成甲酸和氯化氢在碱催化剂作用下,可发生加成作用,例如氯仿和丙酮在氢氧化钾作用下,于50℃发生加成反应在碱溶液中,三氯甲烷与伯胺反应,形成胩,胩有特殊气味,用以检查伯胺的存在。三氯甲烷进一步氯化,可生成四氯化碳。

在碱溶液中三氯甲烷与酚反应,生成羟基芳香醛,在无水三氯化铝的催化作用下,三氯甲烷与苯反应,可生成三苯(基)甲烷。这是制备三苯甲烷染料的一种重要方法。

以上内容参考  百度百科-氯仿

氯仿: RNA脱离DNA及蛋白,从混合液中层析到水相.水相中的RNA可用异丙醇沉淀浓缩.

接着用异丙醇进行二次沉淀,随后用乙醇洗涤沉淀,可去除所有残留的蛋白质和无机盐. RNA样品中如果含有无机盐, 有可能对后续实验操作中的一些酶促反应产生抑制作用。


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