样本是细胞或组织,要在显微镜下观察结果,可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
elisa(酶联免疫吸附试验)用到了免疫学原理和化学反应显色,待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液,因而没有用到组织包埋、切片等技术,这是与免疫组化的主要区别,操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面,从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上,这就是;吸附;的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同,只是因为所检测的样品不同,从而在操作方法上有所不同。
Elisa多用于定量分析,其灵敏度非常高。
westernbolt先要进行SDS-PAGE,然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上,而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品,可以用于定性和半定量。
免疫学三大工具,免疫组化、Western、ELISA,分别用于定位,定性和定量。
以下western和Elisa的区别不是原创,是找的资料。
westernblotting可以看到特异性的条带,但是定量比较烦elisa可以直接读出浓度,但是如果抗体有非特异性结合,那得到的数值就不可信。
WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度**物对目的蛋白的影响WB所检测的一般是抗原,而Elisa抗原抗体都可以检测。
WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚体、降解产物等,一句话,WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的;而Elisa无能为力,一锅端了。
WB所适用的一抗一般是线性位点的,ELISA线性或构象型抗体都可以使用。
从另一个意义上讲,WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定,而Elisa不行。
WB一次处理量就是一块胶版,10-20个样品最多了。
Elisa一块96孔板一次可以处理96个样本,可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。
WB操作常见的非特异性条带,膜本底差,显色不好等等缺点在Elisa上表现得要好得多。
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