由于其被确认为一种“看家基因(house keeping gene)”,因而在很多western和RT-PCR实验中通常用来作为内参使用。
一般室温下孵育在30-60分钟,120分钟。β-actin由375个氨基酸组成,分子量大小为42-43kDa左右。β-actin作为内参是得到了公认的,这是针对大多数组织和细胞来说的,它广泛分布于细胞浆内,表达量非常丰富,其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下,如脂肪组织或细胞内,β-Actin的表达量就很少。一般室温下孵育在30-60分钟,120分钟,对于研究性质的抗体孵育时间,也可按照上述的时间,但也有人提出于4℃冰箱中过夜孵育,根据我们的经验一般不主张于4℃冰箱中过夜。
需要加beta-actin的一抗,beta-actin分子量42,如果您的蛋白也是差不多大小,那么需要上两次样品,分别做您的目的蛋白和beta-actin,当然您如果做熟练了也可以上一次样,先做目的抗体,压片后strip膜再做beta-actin。如果您的目的蛋白在其他位置,那更方便,上一次样,封闭后把膜裁开,分别加您的目的蛋白一抗和beta-actin的一抗。欢迎分享,转载请注明来源:优选云