生物学的探针是什么概念?

生物学的探针是什么概念?,第1张

生物学意义的探针(probe)是指能与特定靶DNA分子发生特异性作用、并能被特定方法探知的分子。DNA指纹技术应用的核酸分子探针是指经示踪物(即标记物)标记的、能与互补靶核酸序列实现退火杂交的已知核昔酸片段。核酸分子探针可分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针和人工合成的寡核苷酸探针等。DNA指纹检测多用基因组DNA探针,另有一部分是参照VNTR位点的核心序列由人工合成。制备DNA指纹图时选择探针与选择限制酶同样重要,探针选择的基本原则是:探针必须具备高度特异性,探针制备与标记容易,以及探针的杂交必须稳定等因素。

你好,很高兴回答你的问题。

探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。

基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是单链,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。

进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的克隆,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。

为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。

寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。


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