配制固体培养基需要加入的琼脂量是多少?

配制固体培养基需要加入的琼脂量是多少?,第1张

固体培养基的配置中,琼脂的比例在15%~20%均可。

琼脂粉一般加15g,以下为LB固体培养基的配置方法

LB固体培养基,倒制时培养基温度不宜过高,否则冷却后平板会产生大量冷凝水。

LB(Luria-Bertani)固体培养基

在950ml

ddH2O中加入

胰化蛋白胨(tryptone)

10g

酵母提取物(yesat

extract)5g

NaCl

10g。

用1M的NaOH调节pH值到7.0,定容至1L。

然后加入15g琼脂粉。

121℃,20min高压灭菌,待冷却至50-60℃时,倒制平板。

倒制时培养基温度不宜过高,否则冷却后平板会产生大量冷凝水。

LB培养基,是微生物学实验中最常用的培养基,用于培养大肠杆菌等细菌,其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。

LB培养基的配制:

成分

胰蛋白胨(tryptone) 10g

酵母提取物(yeast extract)5g

氯化钠(NaCl) 10g

固体培养基另加 琼脂粉 15-20g

加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH(约0.2ml)调pH至7.2,121℃灭菌30min

配制方法

(1)称量 分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl,置于烧杯中。

(2)溶化 加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中,用玻棒搅拌,使药品全部溶化。

(3)调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。

(4)定容 将溶液倒入量筒中,加水至所需体积。

(5)加琼脂 加入所需量琼脂,加热融化,补足失水。

(6)分装、加塞、包扎。

(7)高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。

这是一种应用十分广泛的天然培养基,其中的牛肉膏为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素,而NaCl提供无机盐牛肉膏 0.3g蛋白胨 1g氯化钠 0.5g琼脂 2g自来水 100mLpH 7.0~7.2灭菌 1.05kg/cm2,22min倒平皿前加入制霉菌素(5000u/ml) 1ml至100ml培养基中(50u/ml)混匀,将培养基倒入平皿内约15ml/皿。将另一部分培养基(不加制霉菌素)分装试管(保种),其装量不超过试管高的1/4,灭菌后,排斜面,斜面长度不超过试管总长的一半。


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