植物生理学中细胞分裂素含量的测定实验中的关键步骤有哪些？

[实验步骤]：

1．挑选大小一致的萝卜种子，用蒸馏水浸泡15min，放在有湿滤纸的培养皿中，在26。C黑暗条件下萌发30h。

2．用裰子取下大小一致的萌发萝卜幼苗的子叶10对，去除下胚轴，子叶在蒸馏水中浸泡以去除内源激素，吸水纸吸干水后用

1／10000灵敏度的电子天平称鲜重：

3．分别取不同浓度的6-BA标准液〔100，200，300，400，500，6开，7开／L）各2m1于放有滤纸的培养皿中，另外吸取

2m1蒸馏水作空白对照：三分重复：将称好的萝卜了叶放在各培养皿中，25℃光照箱中培养，注意补充6书A标准浯液以保

持湿润。

圭3d以后，吸水纸吸收水分，称量处理后的子叶的鲜重。

5．以6一BA溶液的浓度为横坐标，子叶鲜重的增加量为纵坐标，亻故标曲线图。

6．如需检测植物提取液中6-BA的含量，可用上述同样的方法处理萝卜子叶，测定子叶的增加量，通过查标准曲线求得。

过渡金属离子的d轨道在晶体场的影响下会发生能级分裂。金属离子的d轨道没有被电

子充满时，处于低能量d轨道上的电子吸收了一定波长的可见光后，就跃迁到高能量的d轨道，这种d-d跃迁的能量差可以通过实验测定。

对于八面体的离子在八面体场的影响下，离子的5个简并的d轨道分裂为二重简并的轨道和三重简并的轨道，轨道和轨道的能量差等于分裂能。

根据 （1）

（2）

式中 h —普朗克常数，J·s；

c —光速，；

—可见光光能，J；

—频率，；

—波长，nm。

常用波数（）的单位表示。由上式知，1 相当于J，用表示，单位为nm时，则有：

是离子吸收峰对应的波长，单位是nm。

对于八面体的和配离子，中心离子的d轨道上有3个d电子，除了受八面体场的影响之外，还因电子间的相互作用使d轨道产生如图3-14所示的能级分裂，所以这些配离子吸收了可见光的能量后，就有3个相应的电子跃迁吸收峰，其中电子从轨道跃迁到轨道所需的能量等于10Dq。

本实验只要测定上述各种配离子在可见光区的相应光密度A，作A～吸收曲线，则可用曲线中能量最低的吸收峰所对应的波长，代入（3）式计算值。

三、 试剂与仪器

仪器 台秤，721（或72）型分光光度计，容量瓶（50mL），烧杯（50mL）

移液管（5mL）。

试剂 15%，EDTA二钠盐（s）。

四、实验方法

（1）溶液的配制 称取0.3g于50mL烧杯中，加少量水溶解，转移至50mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。

（2）溶液的配制 称取0.5gEDTA二钠盐于50mL烧杯中，用30mL水加热熔解后，加入约0.05g，稍加热得紫色的溶液。

（3）溶液的配制 用移液管吸取5mL水溶液于50mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。

（4）测定光密度 在分光光度计的波长范围（420～600nm）内，以蒸馏水作参比，每隔10nm波长测定上述溶液的光密度（在吸收峰最大值附近，波长间隔可适当减少）。

（5）数据处理

a. 以表格形式记录实验有关数据。

b. 由实验测得的波长和相应的光密度A绘制，和的吸收曲线（A～吸收曲线可由HG软件绘出）。

c. 分别计算出上述配离子的值。

细胞的有丝分裂是一个连续动态的变化过程，但可以通过它的形态变化，特别是细胞核中的染色体行为，人为地划分阶段，并进行比较研究。在自然状态下，一大群处于各个分裂期的细胞混杂在一起。必须仔细观察，寻找有丝分裂过程各期典型形态特征的细胞，从而建立起细胞周期的概念。

植物的分生组织（如根尖分生区、茎尖生长点等）细胞，能够通过有丝分裂增加其数目。依据植物细胞分裂周期中各个时期细胞中染色质或染色体的形态、数目、位置变化，确定该细胞所处的时期。为了看清染色体或染色质，要用碱性染料将其染色

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