róng xuè fǎn yìng
免疫溶血反应是补体参与的抗体致敏红细胞的溶解反应。参与反应的成分有3种：①红细胞，一般用绵羊红细胞（SRBC）；②抗红细胞抗体，也称溶血素，多为家兔抗SRBC的抗血清；③补体。
溶血反应的直接用途是测定总补体活性或溶血素的效价；也可利用溶血系统作为指示剂，检测另一反应系统的抗原或抗体，即补体结合试验。
2 溶血反应的检测试剂2.1 （一）补体检测血清补体水平或补体活性时需要从受检者采血及分离血清。做补体结合试验时多采用豚鼠血清作为实验用补体的来源。因为补体在体外极易衰变，所以检测补体活性的血清标本和作为补体试剂的血清必须新鲜。
受检者一般做静脉采血，在动物可做心脏采血。血清分离后应及时使用，最好在当日用完。必须保存时采用小量分装的办法，置－70℃下可保存数月，避免反复冻融。冻干制品可长期保存，但其活性都不同程度地比新鲜血清降低。
以豚鼠血清作补体来源时，应考虑到个体差异。为了确保血清中补体的有效活性，必须取3只以上豚鼠的血清混合后使用。
2.2 （二）绵羊红细胞从绵羊颈静脉无菌采血，抽出血液后立即小心地注入放有玻璃珠的无菌干燥三角烧瓶中，充分旋摇15～20min，以除去纤维蛋白。也可将羊血与等量或2倍量的Alsever血液保存液混合，既有抗凝作用，又适于储存；分装后置4℃，可使用3周。
实验前，取适量抗凝血，加入8～10倍的生理盐水，轻轻混匀后2000r/min离心5min；弃上清，沉淀的红细胞用生理盐水再洗一次，这时上清为无色澄清，如显红色说明有溶血现象，应更换新鲜羊血；第三次用缓冲液洗涤，弃上清，取压积红细胞用缓冲液配制SRBC悬液，使用浓度一般为2％～5％。为使红细胞浓度标准化，可吸取少量红细胞悬液，中入20～30倍的稀释液中，在542nm波长比浊，以吸光度为标准调整红细胞浓度。
2.3 （三）溶血素溶血素即抗绵羊红细胞抗体，多是以绵羊红细胞免疫家兔而得到兔抗血清。一般没有必要进一步提纯抗体，但在试验前需先进行加热56℃30min或60℃3min以灭活补体。
由于补体溶血试验及补体结合试验均是比较精密的试验，其结果与溶血素的效价有关，所以试验需要滴定溶血素效价；在制备抗血清的过程中，于动物采血前和分离抗血清后也需要滴定溶血素效价。
1．溶血素稀释稀释溶血素时，要先对效价有个大概的估计，以便确定稀释度的范围。动物采血前滴定时稀释范围要稍大些，实验前的滴定便以原先的记录作为参考（溶血素的效价多在数千单位以上）。溶血素稀释一般不采用连续倍比稀释法，因为稀释到最后时跨度太大，不容易确定单位。为了便于操作，现举例按表141配制不同稀释度的溶血素。
表141不同浓度溶血素的配制
最终稀释度 缓冲液（ml） 所加溶血素 稀释度 体积（ml） 1:1000 1.8 1:100 0.2 1:2000 0.2 1:1000 0.2 1:3000 0.4 1:1000 0.2 1:4000 0.2 1:2000 0.2 1:5000 0.8 1:1000 0.2 1:6000 0.2 1:3000 0.2 1:8000 0.2 1:4000 0.2 1:10000 0.2 1:5000 0.22．效价滴定将稀释好的溶血素及其他试剂按表142所示逐步加入到各试管中，放置37℃水浴，不要盖上水浴箱的盖子，以免盖子上冷凝的水蒸气滴入试管内引起非补体性溶血。30min后取出观察结果。
表142溶血素的滴定
管号 溶血素稀释度 试管内加的各种试剂材料 结果 溶血素（ml） 1:60稀释补体（ml） 缓冲液（ml） 20％羊红细胞（ml） 1 1:1000 0.1 0.2 0.2 0.1 全溶 2 1:2000 0.1 0.2 0.2 0.1 全溶 3 1:3000 0.1 0.2 0.2 0.1 全溶 4 1:4000 0.1 0.2 0.2 0.1 全溶 5 1:5000 0.1 0.2 0.2 0.1 大部分 6 1:6000 0.1 0.2 0.2 0.1 微溶 7 1:8000 0.1 0.2 0.2 0.1 不溶 8 1:10000 0.1 0.2 0.2 0.1 不溶 9 （对照） － － 0.5 0.1 不溶温育反应后，完全溶血的试管内液体红色透明，放置一段时间后管底无细胞沉淀，离心后可见少许细胞碎渣。不溶血的管内液体浑浊；放置后可见红细胞沉淀，上清无色透明。不同程度的不完全溶血介于两者的中间变化态。
按照以上标准，以产生完全溶血的最高稀释管为最大有效反应管，以该管的溶血素稀释倍数为溶血素产效价。例如表142中的溶血素效价应为1:4000；在1:4000稀释的情况下，反应液中所含溶血素的的量为1U/ml。
做补体活性测定或补体结合试验时，一般使用2U/ml溶血素（在本例做1:2000稀释），与SRBC悬液等体积混合。
2.4 （四）稀释缓冲液磷酸缓冲液或巴比妥缓冲液等均可用于溶血试验，pH值应调至7.2～7.4之间。另加入适量氯化钠以保持等渗，并适当地加入一些钙离子和镁离子，这是补体活化所不可缺少的。有的配方还加入0.1％的明胶以使蛋白溶液稳定；加入0.01％NaN3可以防腐，利于较长时间保存。
3 溶血反应测定补体法3.1 （一）CH50试验原理补体最主要的活性是溶细胞作用，这种活性很容易通过溶血反应进行检测。在一个适当的、稳定的反应系统中，溶血反应对补体的剂量依赖呈一个特殊的S形曲线（图141）。
图141溶血程度与补体含量的关系
从图141可以看出，在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化不能使溶血程度有显著改变，速溶血对补体量的变化不敏感。但在半溶血（50％溶血）上下时曲线最陡，即使补体含量仅有较小变动时，溶血程度也会发生较大的改变，也就是说对补体量的变化非常敏感。故采用50％溶血作为终点指标要比100％溶血敏感得多，这一方法称为补体50％溶血（plementhemolysis50％），简称为CH50。
3.2 （二）CH50试验方法取新鲜血清标本进行试验。按表143的要求在各管中加入试剂和反应物，一起放37℃水浴箱中温育30min。
做CH50试验时，应同时配制50％溶血的标准管。取2％SRBC悬液0.5ml，加2.0蒸馏水，使SRBC全部溶解；再加入2.0ml1.8％NaC1溶液校正为等渗溶液；最后加入2％SRBC悬液0.5ml，即成为50％溶血状态；混匀后取该悬液2.5ml，随试管一起进行温育，便是50％溶血标准管。
表143总补体溶血活性测定
试管号码 1:20稀释血清（ml） 巴比妥缓冲液（ml） 2U溶血素（ml） 2％羊红细胞（ml） 1 0.10 1.40 0.5 0.5 2 0.15 1.35 0.5 0.5 3 0.20 1.30 0.5 0.5 4 0.25 1.25 0.5 0.5 5 0.30 1.20 0.5 0.5 6 0.35 1.15 0.5 0.5 7 0.40 1.10 0.5 0.5 8 0.45 1.05 0.5 0.5 9 0.50 1.00 0.5 0.5 10 0.00 1.50 0.5 0.5温育后将所有试管2500r/min离心5min，通过观察比较，选择溶血程度与标准管相近的两管在分光光度计上分别读取吸光度，以最接近标准管的那一管定为最高有效反应管，取其稀释倍数代入下列公式，求得CH50的测定值（单位U）。
每毫升血清总补体活性（单位）＝×稀释倍数
用CH50法测定总补体溶血活性时，所测得的值与反应体积成反比例关系，上例采用的液体总量为2.5ml，测得的总补体活性的参考范围为50～100U/ml。
3.3 （三）临床意义CH50法主要检测的是补体经典途径的溶血活性，所反映的主要是补体9种成分的综合水平。如果测定值过低或者完全无活性，首先考虑补体缺陷，可分别检测C4、C2、C3和C5等成分的血清含量；严重肝病时血浆蛋白合成能力受损，营养不良时蛋白合成原料不足，这些也都可以不同程度地引起血清补体水平下降。
在患系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎等自身免疫病时，血清补体水平随病情发生变化。疾病活动期补体活化过度，血清补体水平下降；病情稳定后补体水平又反应性增高。另外，补体各成分在不同的自身免疫病时可有特征性的表现（详见第二十五章），因此补体检测常可作为自身免疫病诊断或是否有疾病活动的参考指标。
问题一：溶血反应是什么? 输血是急救和防治疾病的重要措施，但输血也可引起不良反应，有时甚至非常严重，带来了一定危险性。输血不良反应是指在输血中或输血后，受血者发生了用原来的疾病不能解释的新的症状或体征。输血不良反应按发生的时间分即发型和迟发型，即输血时或输后24小时内发生的和输后几天至几十天发生的。
一、过敏性反应和荨麻疹
输血后可发生轻重不一的过敏反应，轻者只出现单纯的荨麻疹；中型为过敏性反应；重度可发生过敏性休克和死亡。这些反应属于血浆蛋白免疫性反应，即抗原抗体反应。
1、原因：
（1）IgA抗体：有些受血者缺乏IgA，当输血或其他 *** 后产生抗IgA抗体（可不一定有输血或妊娠史），当输入相应IgA时便发生IgA的抗原抗体反应。
（2）过敏体质：对普通变应原（如花粉、尘埃等）敏感的人，易发生中度至严重荨麻疹，这可能由于IgE抗特应性变应原所致。
（3）被动获得性抗体：献血者的抗体（如青霉素）通过输血传给受血者，当受血者接触相应抗原时可发生过敏反应。
（4）低丙种球蛋白血症：此种患者当注射免疫球蛋白时易发生过敏反应。
2、症状和体征
（1）轻度：痛痒、局部红斑、荨麻疹、血管性水肿和关节痛。血液中嗜酸性细胞增多。
（2）重度：支气管痉挛，发绀、呼吸困难、肺部有喘鸣、脉快、低血压、胸骨下痛、胸部压迫感、休克、喉头水肿以至窒息。有的患者易伴有发热、寒战、咳嗽、恶心、呕吐、腹痛和腹泻等症状。
二、发热反应
在输血期间或输后1-2小时内体温升高1摄氏度以上并有发热症状者。
1、原因
（1）热原：热原是由细菌和不洁物产生的，如蛋白质、死细菌及细菌产物。
（2）免疫反应：多次输血或妊娠后受血者产生白细胞抗体（也可以是血小板或血浆蛋白抗体），当再次输入血细胞（也可是全血）时可产生抗原一抗体反应，激活补体，进一步引起白细胞溶解，而释放热原。
2、症状和体征
常表现为畏寒、寒战、发热、出汗，体温可达38-41摄氏度。反应出现的时间不尽相同，一般在输血开始后15-120分钟内发生，当患者白细胞凝集素效价高时，可在开始输血5分钟就出现面潮红、热感，输血后1小时出现高热。某些患者可伴有恶心、呕吐、皮肤潮红、心悸、心动过速和头痛，反应持续30分钟至数小时后完全消退。
三、溶血性输血反应
溶血性输血反应是输血后红细胞受到破坏而引起的一系列反应，有急性溶血性输血反应和迟发型溶血性输血反应之分。
1、原因
（1）免疫性溶血反应：一、ABO血型不合：抗体为IgM抗体，为天然完全抗体，主要是血管内溶血。二、Rh血型不合：抗体为IgG抗体，为免疫性不完全抗体，主要是血管外溶血。三、其他血型系统血型不合引起的溶血：如MNSs、Lewis、Kell、Di等等，发生的溶血有血管内或血管外溶血。四、献血者间血型不合：见于大量输血或短期内输入多个献血员的血。
（2）非免疫性溶血反应：此类反应较少见，包括低渗液体输注；冰冻、过热或机械操作作破坏红细胞；某些药物的混入；献血或受血者红细胞有缺损（如某些红细胞缺陷性疾病）
2、症状和体征
（1）这类反应多半在输血过程初期，输入数十亳升后发病，表现为寒战、面潮红、呼吸困难、低血压、创面渗血，出现血红蛋白尿，尿少，尿闭以至发展成肾功能衰竭和尿毒症（常于反应后1-2周变得明显）。
（2）患者可突发休克，可发生广泛渗血及凝血障碍而一步引起DIC。
（3）迟发性溶血反应：主要属于血管......>>
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