化学发光法检查更准确
化学发光法采用化学发光燃料进行测试的方法,灵敏度高,分析方法简单快捷,检测时间短及诊断范围宽等优点,相对于酶联法,化学发光法检查更准确。
化学发光法主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理,利用仪器对体系化学发光强度的检测,而确定待测物含量的一种痕量分析方法。
酶联免疫吸附试验是一种固相免疫测定技术,其先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。
扩展资料:
一、化学发光法分类:
1、依据供能反应的特点,可将化学发光分析法分为:
1)普通化学发光分析法(供能反应为一般化学反应);
2)生物化学发光分析法(供能反应为生物化学反应;简称BCL);
3)电致化学发光分析法(供能反应为电化学反应,简称ECL)等。
2、根据测定方法该法又可分为:
1)直接测定CL分析法;
2)偶合反应CL分析法(通过反应的偶合,测定体系中某一组份);
3)时间分辨CL分析法(即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实现多组份测定);
4)固相、气相、液相CL分析法;
5)酵联免疫CL分析法等
二、酶联法实验步骤
1、将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应,后加入酶标抗体与免疫复合物结合,用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离的未结合成分。
2、加入酶反应底物,根据底物被酶催化产生的颜色及其吸光度(A)值的大小进行定性或定量分析的方法, 步骤其实很简单:ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。
3、将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品,这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内。
4、经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。
参考资料来源:百度百科-化学发光法
参考资料来源:百度百科-酶联法
细胞培养板是细胞培养实验中常用和重要的耗材,主要形状有U型和V型、规格也有多重96孔、48孔,24孔,12孔,6孔等,不同的实验需要细胞培养板的规格、形状各不相同,大家是否怎么选择细胞培养板、如何使用细胞培养板、不同的细胞培养板各有什么用途呢?细胞培养板的选择:
细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型)培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。
(一)平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择:
贴壁细胞一般用平底培养板。
悬浮型细胞的培养一般用V型。
U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。
V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。
不同型状的板子自然有不同用途。平底的什麼类型的细胞都可用﹐但当细胞数目较少﹐如做克隆时﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等实验时﹐无论贴壁和悬浮细胞﹐一般均用平底板。至於U或V型板﹐一般在某些特殊要求时才使用。如在免疫学方面﹐当做两种不同淋巴细胞混合培养时﹐需要二者相互接触以刺激﹐因此﹐一般需要U型板﹐因细胞会由於重力的作用而聚集在一个很小的范围内。V型板的用途更少﹐一般用于细胞杀伤实验时﹐为了使效靶细胞紧密接触﹐常使用V型板﹐但这种试验也可用U型板替代(加入细胞後﹐低速离心)
如果是养细胞的话, 通常是选用平底的, 另外要特别注意材质, 标示%26quotTissue Culture (TC) Treated%26quot就是养细胞用的。
圆底的好像没听说过拿来养细胞。 圆底的通常是拿来做分析, 化学反应, 或是保存样品用的, 因为圆底比较好将液体吸得乾净, 如果用平底的就不好吸了。 不过, 如果你是要测吸光值的话, 一定要买平底的才行。
大部分细胞培养都用平底培养板,便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致,还便于MTT检测。
圆底培养板主要用于同位素掺入的实验,需要用细胞收集仪收集细胞的培养,如%26ldquo混合淋巴细胞培养%26rdquo等。
(二)问题集锦
问:我看到培养板有4、6、12、24、48、96孔几种规格 ,但不知道到底什么实验用哪种规格,请指教。
答:要根据你具体的实验要求,流式一般用6孔,MTT一般用96孔,细胞爬片一般用24孔等!要具体根据你实验来定!
问:请问哪位高手知道Terasaki板是什么培养板,与普通细胞培养板有什么区别?谢谢!!
答:Terasaki plate主要是用于晶体学研究,产品设计便于对晶体的观察与结构分析。有两种sitting 和handing drop两种方法,两种方法应用产品的外形结构也不同。材料上选择crystal class polymer ,特殊的材料有利观察晶体结构。
细胞培养板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于细胞贴壁生长与伸展。当然还有浮游细胞的生长材料,同时还有low binding surface,有关更多实验材料上的应用与对材料的选择。
问:我想测吸光度用酶标仪,用多孔细胞培养板行吗?请问酶标板 多孔细胞培养板有什么区别?
答:用多空细胞培养板测吸光度肯定可以拉,我们经常用它来做样品的蛋白定量和MTT检测。
区别:酶标板一般要比细胞培养板贵,细胞板主要做细胞培养,但也可以用来测蛋白浓度酶标板包括包被板和反应板,一般不能用做细胞培养,它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测,它需要更高的要求还需要特定的酶标工作液。如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子:
【操作步骤】
1.加样品:将标本稀释液100ul(或2滴)加到包被板内(预留阴阳性及空白对照2-5孔),将待检血清用PBS或生理盐水按1:20稀释后取10ul加入反应孔内。
2.加对照:加入阴性对照1-3孔,阳性对照1孔,各100ul对照血清。空白对照1孔空置。
3.温育:将反应板震荡使样品混匀后,置37℃温箱或水浴反应20分钟。
4.洗板:用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。
(1)手洗:将反应板孔内容物倾出,将洗涤液注满反应孔,放置30秒钟后用力甩去,如此重复5次后拍干。
(2)机洗:5次,每孔注入洗涤液200ul或注满,停留30秒钟后吸尽拍干。
5.加酶标工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶标工作液,置37℃温箱反应20分钟后,洗板5次,洗板操作同步骤4。
6.显色和终止反应:将底物A、B液各50ul(或1滴)加到反应孔内,37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul(或1滴)混匀终止反应。
【结果判定】
1.酶标仪设定波长450nm,先用空白调零,然后测定各孔OD值如果选用双波长测定,不必设置空白对照孔。
2.当阴性对照平均OD值小于0.08,阳性对照(pc)OD值大于0。30时,说明试剂盒有效且实验操作正确,否则应当重复试验。
3.临界值(CUT%26mdashOFF VALUE)=0.15+阴性对照平均(NC)OD值(当阴性平均OD值小于0.05时,按0.05计算当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算)。
4.标本OD值%26le临界值为阴性,标本OD值%26gt临界值为阳性。
常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量:不同孔板所加培养液的液面都不宜太深,一般在2-3mm范围,结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体(氧气)交换,而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
培养器皿 面积(cm2)培养液量(ml) 细胞量
96 孔培养板 0.32 0.1 10e5
24孔培养板 2 1.0 5%26times10e5
12孔培养板 4.5 2.0 10e6
6孔培养板 9.6 2.5 2.5%26times10e6
3.5 cm 培养皿 8 3.0 2%26times10e6
6 cm 培养皿 21 5.0 5.2%26times10e6
10 cm 培养皿 55 10.0 13.7%26times10e6
25cm2 培养瓶 25 5.0 5%26times10e6
75cm2 培养瓶 75 15~30 2%26times10e7
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