大肠杆菌的纯化分离中扩大培养的目的

大肠杆菌的纯化分离中扩大培养的目的,第1张

主要目的是满足大肠杆菌正常的生长需要(因为原来的培养基营养物质等条件毕竟有限)。

微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水。有的化合物既是碳源又是氮源、能源。生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物,但不一定需要外界补充,有的微生物可以自身合成。在提供上述几种主要营养物质的基础上,培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌,培养后可在LB固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤:

1.称量:准确称取各成分。蛋白胨0.5g,酵母提取物0.25g,氯化钠0.5g,加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。

2.溶化:加热熔化,用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂,整个过程不断用玻棒搅拌,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

3.调pH:用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。

4.灭菌:在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基,加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好,放入灭菌锅内,1kg压力灭菌15min。

5.倒平板:灭菌后,待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是:①将灭过菌的培养皿放在火焰旁,右手拿装有培养基的三角瓶,左手拔出棉塞;②右手拿三角瓶,使三角瓶的瓶口迅速通过火焰;③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖;④待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置。

倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。向培养皿中转移已灭菌的培养基时,也不要把培养基沾在皿壁上。否则,空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖,并污染皿内培养基。

对于微生物来说,纯化培养,是指从混杂的微生物群体中分离获得某一个特定的菌株后单独进行培养的过程。从野生混合菌群中分离培养某种特定的微生物,或从已经多次传代培养的某菌群中按照特定指标对微生物菌种进行优化分纯等,均属于纯化培养。

扩大培养是对保藏的纯化菌种进行活化和逐级繁殖培养,从而为生产提供相当数量代谢旺盛并满足一定生理要求的微生物细胞(种子)的方法。例如在发酵工厂中,从保藏菌种到发酵罐接种,微生物细胞数量需要进行逐级扩增,以保证进入发酵罐时的接种数量有足够多的菌种量。即扩大培养只是单纯细胞数量的扩增,不涉及微生物的种类纯化。

1》不可以,大肠杆菌是原核生物,只含核糖体,只能合成蛋白质,不能对蛋白质进行加工,生产糖蛋白,需要糖基化过程人的糖蛋白需人工糖基化,才具生物活性,所以,单用大肠杆菌不行

2》

1、提取β-珠蛋白的mRNA

2、逆转录mRNA合成互补DNA,再进行DNA克隆

3、将目的DNA连接到载体(质粒)中,在转移到大肠杆菌细胞中

4、删选出含有目的基因的菌落

5、扩大培养大肠杆菌,表达目的β-珠蛋白

3》碱基互补配对原理;含有目的基因的DNA片断上有放射性同位素标记,如果杂交成功,可以检测到


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