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PCR原理：
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
扩展资料：
特异性强 PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
灵敏度高 PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中最小检出率为3个细菌。
PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够 的。
3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。
循环次数 循环次数决定PCR扩增程度。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30～40次之间，循环次数越多，非特异性产物的量亦随之增多。
参考资料：百度百科——PCR扩增
贝利(Pele)，足球上帝，“球王(O Rei)”。无论哪个名字，他给人们留下的印象是一样的：震惊世界的超级巨星，打破记录的足球偶像。凭借三届FIFA世界杯?冠军的骄人战绩，艾迪逊·阿兰蒂斯·德·纳西曼托(Edson Arantes Do Nascimento)，又名贝利，是一位不断创新的足球天才。每一次触球，每一记传球，每一回盘球，贝利总能为球迷带来一些前所未有的镜头。凭借对射门良机的敏锐本能，洞察绝妙传球的犀利目光和传奇般的盘球技艺，贝利正是最优秀的足球运动员。如果桑托斯队在全世界诸多球迷眼前上演这一“完美游戏”的话，这主要还是归功于他们著名的10号。
1940年10月23日，艾迪逊·阿兰蒂斯·德·纳西曼托出生于巴西特雷斯科拉索内斯镇 ，在巴西是“三颗心”的意思。贝利 11 岁时就被前巴西国家队教头瓦尔德马·得·布利托(Waldemar de Brito)相中，15 岁时加入桑托斯队，而 1956年9月未满16岁的他就在自己的首场正式比赛 —— 对阵 FC 科林斯队(FC Corinthians)中进球。贝利传奇就此诞生。
1958年，他第一次参加FIFA 世界杯?时才刚满17岁。当这个名不见经传的弱小少年以眩目的技艺将比赛带入高潮时，整个世界为之震动了。事实上，他是凭借运动员的意志在巴西第三场比赛(对阵原苏联)中在先发阵容中出现的。贝利受过伤，但从治疗室返回场上后，其他队友毫无介怀，全力支持由他、加林查(Garrincha)和瓦瓦(Vava)组成的前锋铁三角。
他在四分之一决赛中以一球小胜威尔士，在与法国的半决赛中上演帽子戏法，答复了队友的支持。他技艺娴熟、速度犹如闪电、聪明而又投机，似乎不可阻拦。他魅力四射，在决赛对阵瑞典时以两粒绝妙的入球卷走FIFA世界杯?。第一粒入球，他大胆将球挑过最后一个后卫，然后扫球入球门；第二粒入球是一记令人兴奋的头球，瑞典门将毫无防备。后卫希戈.帕林(Sigge Parling)赛后坦言：“第五个入球后，我都忍不住想拍手”。
终场哨响，桑托斯队门将吉尔马(Gilmar)回忆说当时贝利泪流满面，被队友抬在肩膀上，他不得不不断安慰这位偶像少年。贝利在随后的几年中不断成长，让所有后卫胆战心惊，并巩固足球天才的地位。1959年他攻入127球，1961年110球，两次捧走南美解放者杯（1961，1962），两次世界俱乐部冠军（1962， 1963）和九次圣保罗州冠军。
1962年贝利参加智利FIFA世界杯?，准备震惊全世界。这是展示他才能的最佳舞台，但不幸的是，贝利在巴西队的首场比赛就负伤，未能再次上场。他在场外亲眼目睹自己的队友重新夺回世界杯冠军。此时，贝利已经为众人瞩目 - 然而1966年他再次不幸，在巴西队第三场与葡萄牙的比赛，被担架抬下场。但是不同的是，这次他不得不在场外亲眼目睹自己的球队被淘汰出局。
“黑珍珠”不得不等到 1970 年的墨西哥世界杯赛上再次向世人展示自己的才能。在队友查仙奴(Jairzinho)、托斯塔奥(Tostao)、里维里诺(Rivelino)和卡洛斯·阿尔贝托(Carlos Alberto)的鼎力协助下，贝利当年如日中天。在首届以彩色电视信号向全球直播的FIFA世界杯?赛上，贝利似乎注定要赋予足球这项世界运动以新的意义。精彩片段包括：对阵捷克队他尝试从中场远射球门；对阵英格兰一记绝妙的头球，结果英格兰门将戈登·班克斯(Gordon Banks)表现更为神勇，将球扑出；对阵乌拉圭他脚下溜球，晃过对方门将，随后小角度射门，给人们留下了深刻印象。
墨西哥世界杯赛的决赛上，贝利攻入了巴西队象征性的第一百粒FIFA世界杯?入球 —— 纵身一跃，随后一记美妙的头球。“我对头球得分，我有种特殊的感情。我父亲曾经在一场比赛中攻入五个头球 ——我从未能打破他这个记录。”贝利事后说。
意大利后卫塔西休.布尼西(Tarcisio Burgnich)被邀请就决赛对贝利作出评价，他说：“我在赛前告诉自己，‘他和其他人一样都是有骨有肉的’，但是我错了”。巴西队第三次捧杯，成为前所未有的最强队伍已是无可非议的事实，他们因此也得以保留优斯·雷米(Jules Rimet)奖杯。贝利成为在世传奇。决赛后第二天，周日时报(Sunday Times)头条新闻刊登着：“您如何拼写贝利？上-帝。”
贝利的确是位传奇人物，在他卓越而漫长的职业生涯中，他的战绩确实显赫。1969年在马拉卡纳（Maracana）体育场疯狂的球迷眼前他攻入自己第 1，000 粒入球。一场比赛攻入5个球的情况不少于 6次；4个球的情况有 30 次；而帽子戏法有92次！1964年一次与不幸的博塔福格(Botafogo)对阵，他攻入8粒入球！仔细算来，这位天才在1363场比赛中攻入 1281 粒入球，共参加了92场国际大赛。
1974 年他终止了他所谓的“美丽游戏”，一年后重回足坛，“为将这项世界级的运动带给美国公众”效力于美国宇宙队 (New York Cosmos)。最后1977年他最后考虑挂靴。巴西驻联合国大使彬亥罗(J.B.Pinheiro)说，“贝利踢了22年的足球，在此期间他所做的促进世界友谊的努力比任何国家的任何大使都要多”。谁会不同意他这种说法呢？1970年贝利去拉各斯参赛，战乱中的尼日利亚宣布了停火。巴西总统称他是“国宝”，毅然阻止任何可能将他转会到欧洲俱乐部。在桑托斯，为庆祝贝利在马拉卡纳体育场攻入的第 1，000 粒入球，每年的11月19日永远是“贝利日”。
他的绿茵生涯结束后，贝利以他大使的身份不断促进巴西、联合国和联合国儿童基金会的发展。“世界上每个踢球的孩子都想成为贝利 —— 这意味着我有义务教会他们如何成为球员，如何成为顶天立地的人。”这似乎也是上帝存在的理由，不是吗？
贝利 (Pele) 原名埃德森·阿兰特斯·多纳西门托 (Edson Arantes Do Nascimento) 1940年10月23日生于巴西米纳斯吉拉斯州的特雷斯科拉松伊斯镇，从6、7岁开始踢球，12岁入加入圣保罗的包鲁运动俱乐部少年队，15岁进入巴西劲旅桑托斯队，成为职业球员，与队友一起使桑托斯队10次获圣保罗州足球联赛冠军，5次巴西全国联赛冠军，2次南美解放者杯赛冠军，2次洲际杯锦标赛（1980年起改称丰田杯赛）冠军。1957年进入巴西国家足球队，在1958、1962、1966、1970年的4次世界杯赛中作为国家队主力参赛，与队友合作，使巴西队获得第6、第7和第9届世界杯赛冠军，永久拥有“雷米特杯”。1974年转入美国纽约宇宙队踢球。1978年7月18日挂靴。
贝利在20多年足球生涯中共参加过1000多场比赛，射进1300多个球，被称为“球王”。他极善盘带和凌空射门，又能连过数人射门得分。一次曾连过9人后绕过守门员射门成功。贝利被称为“本世纪最伟大球星”，是世界上第一个3次被评为世界最佳足球运动员的超级球星。多次荣获“世纪十大球员”、“世纪运动员”、“20世纪世界最佳运动员”等称号。曾入大学深造5年，获心理学、运动医学等学科的学士学位。
2000年12月，贝利荣获国际足联评出的“本世纪最佳足球运动员”称号。
贝利在1978年挂靴后曾在1995年至1998年任巴西体育部长。1994年任联合国教科文组织友好大使。贝利爱好广泛，1981年开始进入影坛，出演过十几部影片，并导演过一部影片。
1983年，在与第一个妻子离婚后与巴西著名模特儿、白人姑娘苏莎结婚。
荣誉：
俱乐部
1956-1974 桑托斯队
1975-1977 纽约宇宙队
俱乐部荣誉
1956 圣保罗州冠军(桑托斯队)
1957 圣保罗联赛最佳射手(17 球)
1958 圣保罗州冠军(桑托斯队)
1958 圣保罗联赛最佳射手(58 球)
1959 南美锦标赛决赛选手
1959 圣保罗联赛最佳射手(45 球)
1960 圣保罗州冠军(桑托斯队)
1960 圣保罗联赛最佳射手(33 球)
1961 圣保罗州冠军(桑托斯队)
1961 圣保罗联赛最佳射手(47 球)
1961 南美解放者杯(Copa Libertadores)(桑托斯队)
1961 巴西杯冠军(桑托斯队)
1962 圣保罗州冠军(桑托斯队)
1962 圣保罗联赛最佳射手(37 球)
1962 南美解放者杯(桑托斯队)
1962 世界杯冠军(桑托斯队)
1962 巴西杯冠军(桑托斯队)
1963 圣保罗联赛最佳射手(22 球)
1963 世界杯冠军(桑托斯队)
1963 巴西杯冠军(桑托斯队)
1964 圣保罗州冠军(桑托斯队)
1964 圣保罗联赛最佳射手(34 球)
1964 巴西杯冠军(桑托斯队)
1965 圣保罗联赛最佳射手(49 球)
1965 圣保罗州冠军(桑托斯队)
1965 巴西杯冠军(桑托斯队)
1967 圣保罗州冠军(桑托斯队)
1968 圣保罗州冠军(桑托斯队)
1968 巴西杯冠军(桑托斯队)
1969 圣保罗州冠军(桑托斯队)
1969 圣保罗联赛最佳射手(26 球)
1973 圣保罗州冠军(桑托斯队)
1973 圣保罗联赛最佳射手(11 球)
1977 美国冠军(纽约宇宙队)
国际荣誉
1958 瑞典FIFA 世界杯冠军
1959 南美杯决赛选手
1959 南美杯最佳射手(9 球)
1962 智利FIFA世界杯冠军
1966 英格兰FIFA世界杯第一轮
1970 墨西哥FIFA世界杯冠军
92 场比赛、97 粒入球
创记录的巴西最佳射手
1363场比赛中1281粒入球——最高世界记录
1999 年被国际奥运委员会(IOC)选举为“世纪运动员”。
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