实验室常规仪器及下列各项:分析天平:感量0.0001g;分光光度仪。检测茶多酚所用的试剂和溶液所用试剂应为分析纯(AR),水为蒸馏水。
pH7.5磷酸盐缓冲液:磷酸氢钠:称取23.377g磷酸氢二钠,加水溶解后定容至1L磷酸二氢钾:称取9.078g磷酸二氢钾,加水溶解后定容至1L。
酒石酸亚铁溶液:称取1g(准确至0.0001g)硫酸亚铁和5g(准确至0.0001g)酒石酸钾钠,用水溶解并定容至1L(溶液应避光,低温保存,有效期一个月)。
取上述磷酸氢二钾溶液85ml和磷酸二氢钾溶液15ml混合均匀。检测茶多酚操作步骤步骤一:取样按《茶取样》的规定取样。
步骤二:试样的制备按《茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定》的规定,制备试样。步骤三:酒石酸亚铁溶液的制备按《茶水浸出物测定》中的规定,制备试液。
步骤四:pH7.5磷酸盐缓冲液测定准确吸取酒石酸亚铁溶液1mL,注入25mL的容量瓶中,加水4mL和酒石酸亚铁溶液5mL,充分混合,再加pH7.5的缓冲液至刻度。
步骤五:用10mm比色杯,在波长540nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。步骤六:结果计算计算方法和公式茶叶中茶多酚的含量,以干态质量百分率表示。
步骤七:按下式计算:A×1.957×2L1茶多酚(%)=─×─×100100L2×M×m式中:L1—试液的总量,mL;L2—测定时的用液量,mL;M—试样的质量,g;m—试样干物质含量百分率,%;A—试样的吸光度;1.957—用10mm比色杯,当吸光度等于0.50时,每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。
步骤八:如果符合重复性的要求,则取两次测定的算术平均值作为结果。重复性同一样品的两次测定值之差,每100g试样不得超过0.5g。
根据茶多酚易氧化、对某些试剂显色的特性,国内外常用高锰酸钾滴定法(Iowenthal-Neubaur法)和比色法。前者是应用靛红(指示剂)存在时高锰酸钾对茶多酚氧化,根据高锰酸钾氧化的消耗量计算茶多酚的含量,操作简便易行。但滴定终点较难掌握,容易造成误差。后者是以酒石酸铁能与茶多酚生成紫红色的络合物,显色强度与茶多酚含量成正比的原理,计算出茶多酚含量。测定方法简便、快速、重现性好。已被列为国家标准(GB 8313-87)。与此两种测定方法原理相似的有:硫酸铈滴定法、络合滴定法、草酸酞钾比色法、苯酚比色法、福林-丹尼斯显色法、紫外分光光度法等。
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