退火的温度定在55度就ok了，万年不变也没有关系， 50度到60度都差不多。这个说明书也会给。
变性95度上下几乎万年不变。
最后延伸是为了把没有延伸完的片段（如果有）补全。一般4分钟以上都ok。
非特异性扩增产物看你的引物设计的好不好，设计的好就不太会有。
引物二聚体也是，注意设计的引物的二聚体绝对不能在末端配对成功，这会大大降低引物的效率。
二聚体几乎不可避免，所以PCR完成之后，立刻跑个胶，切胶回收就好了，这样二聚体就不会被回收回来，非特异性产物也会减少很多。
做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应－－－－－－－－－－－－－－－－－－
这个问题比较好理解，因为在循环结束后，体系中的taq酶可能很多正处于复制状态，如果此时降到室温，将会影响最终产率。所以再留出5分钟，以使正在复制中的taq酶能够复制完全，以合成更多的目的分子。
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看来可能我的表述不够清楚，那我稍微详细的说下
我们来看看最后一个循环
先95度，dna在高温下变性，解链成单链分子
然后退火，具体温度与所用引物有关，就以55度为例吧。
引物与单链dna模板结合上去
再72度延伸，在taq聚合酶的作用下，引物延伸。
该循环结束。
注意，此时尚有正处于合成过程中的dna链，为了保证充分的得率，所以再增加5分钟，以允许尚处于合成状态的dna分子能够完成整条链的合成。
在rna的逆转录时，也有这样的一个步骤。
用途也是一样的。
不知这下有没有讲清楚？
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