常见的靶向捕获测序方法主要有以下三类
杂交捕获测序是针对感兴趣的目标区域，基于碱基互补配对原理，设计合成核酸探针，对DNA文库进行目标区域杂交富集，并进行测序。其中杂交捕获探针可以与目标区域全部互补，也可以是部分互补。根据杂交介质的不同，可分为固相杂交和液相杂交。
目前NGS应用最广泛的还是液相杂交，将生物素探针、封闭液、DNA在液相环境下进行杂交，使用链霉亲合素磁珠进行富集，通过洗涤除去非特异性结合的核酸，随后对纯化后的文库扩增富集，并进行测序。液相杂交捕获测序可适用于几kb到上百Mb的基因组目标区域的检测，可检测SNV，InDel，CNV，SV，基因融合等。
市面上常用的杂交捕获探针厂家有roche，Agilent，IDT，twist等
在探针设计时，需要评估覆盖位置的序列特征，如果探针有很多落在重复序列区，或者高拷贝序列区，则探针会结合较多的非目标区域。设计更加特异性的探针则可以有效减少非特异序列的结合，提升捕获特异性。
在杂交捕获过程中，重复序列导致的文库之间互相结合，以及文库接头序列导致的文库之间互相结合，都会导致非特异性捕获。通过添加高效的重复序列封闭组分和接头封闭组分，可以显著降低上述文库之间的结合，从而大幅提升捕获效率。
杂交捕获试剂盒厂家则有roche，Agilent，IDT，swift，twist等
杂交和漂洗的严谨性是影响捕获效率的重要因素，通过降低盐离子浓度和升高漂洗温度都会增加漂洗严谨性，更高的漂洗严谨性则会带来更高的捕获效率。但是对于漂洗条件的优化要慎重，漂洗条件的改变虽然会提升捕获效率，但也会影响覆盖均一性。
多重扩增子测序即针对感兴趣的目标区域，设计多重PCR引物进行扩增富集并进行测序的技术。通常适用于检测几十到几千个位点，或几十kb以下的区域。
分子倒置探针(MIP)技术其原理是设计一个口袋状探针，探针结构如图所示，H1和H2能和目标区段退火，然后利用DNA聚合酶将探针缺口补齐，同时添加DNA连接酶，将缺口处磷酸二酯键连接，即可构成一个完整的环状探针。然后通过外切酶将游离的探针消化，完整的探针包括目标区段的序列，利用通用序列（H1、H2之间序列）作为后续文库构建的引物（可添加index和测序引物），扩增产物可以直接作为二代测序文库。
这种方法的优势是特异性好而且捕获完成后的片段直接完成了建库（杂交捕获后还需要构建测序文库，主要是添加Index和测序接头），劣势就是捕获效率很低。
1、目标序列靶向测序是一种对感兴趣的基因组区域进行富集测序的研究策略。目标区域测序的主要优势在于可针对特定区域进行测序，有效降低了测序成本，提高了测序深度，能够更为经济有效地研究特定区域的遗传变异。2 单细胞测序是指单个细胞水平上对基因组进行测序。
3、靶向测序步骤为 样品准备、探针/引物设计、目标序列捕获、文库制备、上机测序、数据分析。
4、单细胞的分离--DNA/RNA的提取和扩增（全基因组扩增和全转录组扩增）---测序以及后续的分析和应用。
相同:使用二代测序
不同：样本处理，文库构建，检测的区域，数据分析流程
根据天津市医保中心最新的文件指示，有七种抗肿瘤药，可以不经过备案，直接在门诊就可以开。我看了一下这七种药，其中和我们肺癌相关的有六种，这六种都是属于肺癌的靶向药，是针对EGFR和ALK基因的。在之前，患者要开这几种药，需要进行双医师的备案，才可以在这备案的两位医生门诊时开具，没有备案的医生是开不出来的。现在流程比较简化了，不需要备案，只要有处方权的医生都可以开得出来。有细心的朋友可能会提到两种药，一个是吉非替尼，一个是埃克替尼。会问为什么名单中没有这两种药，它们还需要备案吗？这两种药早在这批药品取消备案公布之前，就已经实现了不需要备案就可以在门诊开出来。
目前肺癌的靶向药需根据不同的基因检测，有不同的药物，初步主要目前发展分为三代，第一代的肺癌靶向药物主要是针对EGFR突变，敏感突变的患者，有吉非替尼和厄洛替尼两种药物。1、二代的靶向药物是在一代的基础上，进一步强化了对靶向的罕见突变的一些治疗；2、而三代的靶向药物是在前几代的药物基础上，新开发出来的靶向治疗的药物；3、对大多数的基因突变都是有效的，而且疗效比一代、二代更为可靠，副作用也能更小一点。
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