逆转录酶产品特点（BIOG Super Reverse Transcriptase）_备孕

产品特点

◎拥有较高的热稳定性，即使在50℃时也有较好的逆转录表现；

◎可有效克服RNA模板二级结构的影响，对于具有二级结构的RNA模板也能获得理想的结果；

◎超高的灵敏度，最低可检测到1pg的RNA。

应用

◎为实时荧光定量PCR合成第一链cDNA

◎构建cDNA文库

◎DNA测序

◎末端标记DNA

产品介绍

BIOG Super Reverse Transcriptase是公司美国团队在西雅图的实验室研发出的一款具有卓越性能的逆转录酶。利用基因工程技术，我们成功地将BIOG Super的热稳定性大幅提高，即使在摄氏50多度时也有较好的逆转录表现，从而有效克服了RNA模板二级结构对逆转录反应的影响。与其它品牌的逆转录酶相比，BIOG Super与RNA模板具有更高的亲和力，更容易获得完整的cDNA片段，并可检测到低至1pg总RNA中的目标片段，特别适合于总RNA量较少以及目标RNA拷贝数较低情况下的逆转录。

说明：1、引物还可以使用Oligo(dT)18 (50μM）或Random hexamers (50ng/μl)。2、模板如使用Poly（A）＋RNA，用量一般在10pg-500ng之间。3、反应条件：如使用Oligo(dT)18或基因特异性引物，建议反应条件为：50℃逆转录反应45分钟，再85℃ 5分钟灭活逆转录酶。如要获取的cDNA长度大于5kb，逆转录时间可延长到60分钟。使用Random hexamers，反应条件建议为：25℃ 5分钟，50℃ 45分钟，85℃ 5分钟。如模板RNA有二级结构或GC含量较高，逆转录温度可设置为55℃。4、为获得理想的实验结果，建议实验者进行适当的优化摸索。5、用于PCR反应的cDNA产物体积一般不要超过PCR反应体积的1/10。

反转录酶是能促使将遗传信息由RNA传递给DNA的酶，亦叫逆转录酶。此酶是一种依赖于RNA的DNA聚合酶，它以RNA为模板催化合成DNA。1970年从致癌RNA病毒中发现了反转录酶，并认为此酶与病毒的致癌性质有关。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→MRNA→蛋白质绝对化，遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究，已成为研究这些学科的有力工具。

逆转录酶的三个功能：

1、RNA为模板指导的DNA聚合酶活性；

2、DNA为模板指导的DNA聚合酶活性；

3、RNaseh活性。

RNA指导的DNA聚合酶活性；以RNA为模板，催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物，多为色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此没有校正功能，所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。

RNase H活性；由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子，将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子。

DNA指导的DNA聚合酶活性；以反转录合成的第一条DNA单链为模板，以dNTP为底物，再合成第二条DNA分子。

扩展资料：

转录时，细胞通过碱基互补的原则来生成一条带有互补碱基的mRNA，通过它携带密码子到核糖体中可以实现蛋白质的合成。与DNA的复制相比，转录有很多相同或相似之处，亦有其自己的特点。

转录中，一个基因会被读取并复制为mRNA。就是说，以特定的DNA片段作为模板，以DNA依赖的RNA合成酶作为催化剂，合成前体mRNA。

在体内，转录是基因表达的第一阶段，并且是基因调节的主要阶段。转录可产生DNA复制的引物，在反转录病毒感染中也起到重要作用。

通常情况下，细胞内的转录应由DNA到RNA的，所得RNA为信使RNA（mRNA）供蛋白质合成作模板用。而在部分RNA病毒中，要实现自身扩增，必须具有DNA，因此先由RNA逆转录合成cDNA再由cDNA转录出RNA。