制备供试液？

常用的试液有酚酞试液和石蕊试液，还有溴麝香草酚蓝试液。

溴麝香草酚蓝（Bromothymol Blue），又名溴百里香酚蓝，是一种酸碱指示剂、吸附指示剂，化学式为C27H28O5SBr2，易溶于乙醇﹑醚﹑甲醇及稀氢氧化碱溶液。稍溶于苯﹑甲苯及二甲苯，微溶于水，几乎不溶于石油醚。英文简称BTB。

溴麝香草酚蓝试液在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈黄色，在中性的溶液中呈浅绿色。

希望我能帮助你解疑释惑。

微生物限度检查中，供试液制备方法反复提到制成1:10供试液，如“水溶性供试品：取供试品，用PH7.0无菌气化钠-蛋白胨缓冲液，或PH7.

2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:10供试液”。那么这个1:10的供试液是怎么配制？下面两种做法：

1、目前多数做法，固体样品，取10g，加入100ml稀释液；液体样品，取10ml，加入90ml稀释液。

2、而有些人认为1:10是比例浓度，固体样品，取10g，加入100ml供试液；液体样品，是取10ml，加入100ml供试液。

从后续实验操作过程来看，都是要求取相当于1g或1ml的供试液进行操作，另外从微生物限度判断标准来看，也是以1g或1ml含有的菌落数报告，那么，无疑，液体样品的配制，取10ml，加入90ml稀释液，这种方法是对的，利于后续实验步骤的操作。同样，固体样品，也应该是配制完成后液体体积是100ml，但容量瓶不能灭菌，无法定容，同时固体样品10g体积较小，忽略体积的话，直接加入100ml稀释液也可以。

答：

（1）菜田土壤和蔬菜植物供试液的制备

土壤中易被作物吸收利用的养分称为土壤速效养分，这些养分主要存在于土壤溶液和土壤胶体上，用适当的酸碱或盐类的溶液处理土壤，可将他们溶解和代换出来。

① 测定土壤硝态氮、铵态氮和速效钾供试液的制备（此为供试液Ⅰ）。称取相当于2克干土的湿土，放入干净的小浸提杯中，用量筒加入0.5摩尔/升硫酸钠（Na2SO4·10H2O）溶液10毫升，盖好杯子，用力上下摇动300次后，打开杯盖，将折叠好的7厘米中速滤纸，使尖端向下放入小杯子中，以渗透于滤纸锥形体内的清液供测试用。

② 测定土壤速效磷供试液的制备（此为供试液Ⅱ）。称取相当于2克干土的湿土，放入干净的小浸提杯中，用量筒加入0.5摩尔/升碳酸氢钠（NaHCO3）浸提剂10毫升，盖好杯子，振荡和渗滤方法同供试液Ⅰ。

③ 植物供试液的制备（此为供试液Ⅲ）。作物根系自土壤中吸收的无机养分，在作物组织液中有所积累，用组织汁液测定它们的含量，可以反应土壤养分的供应状况，作为营养水平的指标。制备植物供试液的方法很多，现介绍用冷水浸提制备供试液：

把处理好的蔬菜作物待测部位取下，用剪刀剪碎，在1/100托盘天平上称样0.5克，放入小浸提杯中，并用玻璃棒捣碎，然后加蒸馏水10毫升，盖好杯子，振荡和渗滤步骤同土壤供试液的制备。

（2）菜田土壤和蔬菜植株速效氮磷钾养分的测定

①土壤和植株中硝态氮（NO-3-N）的测定。制备标准色阶和供试液中硝态氮的测定，可同时在比色盘中，按硝态氮测定表5-2进行。

表5-2 硝态氮测定表注意事项：

A.硝酸试粉用量要各穴尽量一致，每穴15～20毫克。

B.若供试液显色后超过最高一级色阶，不能比色时，应另取试液再次稀释后，重新测定。但在计算结果时，必须再乘稀释倍数。

C.显色后标准色阶不能长时间保存，为方便起见，可根据显色后的颜色，用油画颜料调成相同的色调，在绘图纸上用湿漏法制成相应的颜色，表明相应的浓度，即制成标准比色卡。

②土壤铵态氮的测定。

测定步骤：

表5-3 铵态氮测定表

制备标准色阶和土壤供试液中NH+4-N的测定，可同时在白瓷比色盘上按铵态氮测定表进行。

注意事项：

A.一般正常的茁壮生长的作物吸收铵离子后，迅速参与蛋白质的合成，植株组织中极少积累游离的铵态氮，所以一般不测定作物汁液中的铵态氮。

B.由于土壤中含有Ca2+、Mg2+离子，干扰铵的测定，一般加酒石酸钾钠作为掩蔽剂，使其钙镁络合成不离解的无色络合物。

C.水田土壤因含有还原性较强的干扰离子须先行处理，把样品摊开过夜，再进行测定。

D.如果铵态氮含量高，溶液产生红棕色沉淀而不能比色时，可进行稀释后再测定。

E.由于土壤中速效氮含量变化很大，各地指标不统一，列于表5-4参考。

表5-4 土壤速效氮（NO-3-N+NH+4-N）分级表（毫克/千克）

③土壤和植株中速效钾的测定。

测定步骤：

制备标准浊度系列与供试液中钾的测定，可同时在小试管中按下表进行。表格里双线左上方，为制备标准比浊溶液，双线的右上方为待测试液，只有标准溶液和待测试液都按要求依次制备好了后，才能同时按双线以下各操作步骤进行。

表5-5 速效钾测定表

注意事项：

A.试液中若有铵、铜、汞等离子存在时影响测定，加EDTA及甲醛试剂能起消除干扰作用。

B.若试液与试剂作用后浓度过大而不能比浊时，可参照硝态氮测定的注意事项2进行稀释，并对计算公式进行相应的修正。

C.为了制备标准浊度等级卡，也可采取浊度深浅不同的线条代替试管制备的标准系列。将绘有线条的纸卡放在试管后面，与标准浊度线条比较，求其含量。土壤速效钾含量指标如下表供参考。

表5-6 土壤速效钾分级指标（Na2SO4浸提—四苯硼钠比浊法）

④土壤和植株中速效磷的测定（钼蓝比色法）。

测定步骤：

标准色阶和供试液中磷含量的测定，可同时在白瓷比色盘上按速效磷测定表进行。

表5-7 速效磷测定表（钼蓝比色法）

注意事项：

A.土壤供试液中加入1摩尔/升的硫酸，是为了中和试液的碱性。加硫酸要搅拌至无气泡发生，使之完全中和，为使各穴体积一致，在土壤以外的其他各穴中须加一滴蒸馏水，若不测定土壤只测定植株时，该步骤可省略。

B.0.4%氯化亚锡在临用前由20%氯化亚锡甘油贮备液稀释制备，当天有效，制备方法见试剂配制。

C.标准比色卡片的制备，可参照硝态氮测定中注意事项3进行。

D.土壤速效磷测出的数据可与表5-8进行对照以判断土壤的供磷水平。

表5-8 土壤速效磷分级标准（NaHCO3浸提—钼蓝比色法）

试剂配制：

0.5摩尔/升硫酸钠溶液：称取化学纯结晶NaSO4·10H2O 161克，加水约900毫升，可加热促使其溶解，冷却后加水至1升，摇匀。

0.5摩尔/升碳酸氢钠溶液：称取化学纯碳酸氢钠42.0克，加水约900毫升使其溶解，必要时可低温加热，用1摩尔/升NaOH溶液调节其pH为8.5，再用水稀释至1升，贮于密闭的试剂瓶中，每隔1月检查一次pH。

活性炭：使用前按测定土壤的方法检查是否含磷。若有磷存在可用0.5摩尔/升的NaHCO3溶液浸泡一昼夜，中间搅拌2～3次，然后用蒸馏水以倾斜法反复冲洗至中性反应，并检查无磷后，烘干备用。

氮磷钾混合标准液：

A.混合标准液的贮备液：在分析天平上准确称取分析纯干燥的磷酸二氢钾（KH2PO4）0.439克，硝酸钾（KNO3）0.7217 克，氯化铵（NH4Cl）0.3819克，硫酸钾（K2SO4）1.3254克，放入250毫升烧杯中，用少量蒸馏水溶解，然后无损的转移入1000毫升容量瓶中，最后加水至刻度摇匀，此溶液中含硝态氮（NO-3-N）、铵态氮（NH+4-N）及磷（P）各为100毫克/升，含钾为1000毫克/升，溶液中加甲苯5滴，可保存3～4个月。

B.二级混合标准液：用刻度移液管分别吸取上述标准液的贮备液2毫升及16毫升，各在100毫升容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀。由2毫升标准液的贮备液稀释成的标准液，含硝态氮、铵态氮、磷的浓度各为2毫克/升，含钾浓度20毫克/升。由16毫升标准液的贮备液稀释而成的标准液含硝态氮、铵态氮、磷的浓度各为16毫克/升，含钾浓度为160毫克/升，该两种二级混合液均不宜长期保存，约1～2周失效。

C.50%醋酸：按醋酸与水1∶1的比例稀释而成。

D.硝酸试粉：称取分析纯硫酸钡（105℃烘干4小时，研细过60目筛）100克，锌粉2克，硫酸锰10克，对氨基苯磺酸4克，甲萘胺2克在研钵中研细混合，最后加入75克柠檬酸，在研钵中一起研细混匀，于棕色瓶中密闭保存，每次用后随即盖严防潮。

E.10%酒石酸钾钠溶液：取酒石酸钾钠10克，溶于100毫升水中。

F.铵试剂（纳氏试剂）：在800毫升烧杯（于500毫升处做记号）中，溶解17.5克KI于50毫升蒸馏水中，缓缓加入饱和氯化汞（HgCl2）溶液（每100毫升中约溶解5.7克 HgCl2，溶解时可稍加热），边加边搅拌，直至形成的碘化汞红色沉淀经搅拌不再溶解为止（约需饱和HgCl2溶液150毫升），然后加入30% KOH溶液至500毫升，再滴加饱和HgCl2溶液至刚出现红色沉淀经搅拌不消失为止。搅拌，盖上表皿，放置暗处过夜使澄清，将上部清液倾倒于棕色试剂瓶中，避光保存，配好的试剂应呈淡黄色，如无色，应再滴加饱和HgCl2溶液。

G.3%EDTA碱液：秤取EDTA 3克，NaOH 1克，溶于100毫升水中。

H.37%甲醛：级别为化学纯，若有沉淀，滤其清液使用，由于贮存过程中部分甲醛氧化而呈酸性，使用前应用稀碱液调为中性。

I.2%四苯硼钠溶液：秤取0.5克四苯硼钠溶于25毫升蒸馏水中，滴加0.2摩尔/升NaOH溶液（2克NaOH溶于250毫升水中）约2滴，调节pH8～9。

J.1摩尔/升硫酸溶液：取浓硫酸（密度1.84克/毫升）6毫升慢慢加入到100毫升蒸馏水中，混匀，然后以甲基橙为指示剂用0.5摩尔/升NaHCO3进行校准，使其一滴恰好中和4滴NaHCO3溶液。

K.2.5%钼酸铵硫酸溶液：称取化学纯钼酸铵25克，溶于约200毫升蒸馏水中，可加热（低于60℃）促其溶解，若有混浊，可过滤，另取浓硫酸275毫升，加入约400毫升蒸馏水中搅匀。待两液冷却后，将钼酸铵溶液缓缓倒入硫酸溶液中，边加边搅拌，使混合液冷却至室温，用水稀释至1000毫升。充分混合后，贮于棕色试剂瓶中。

L.20%氯化亚锡—甘油贮备液：称取结晶的氯化亚锡（SnCl2·2H2O）20克，溶于10毫升浓HCl和90毫升化学纯甘油中（可在热水浴中促其溶解，充分混匀，贮于棕色瓶中，可保存半年以上）。使用前，取20%氯化亚锡甘油1滴，加蒸馏水49滴，摇匀即成0.4%氯化亚锡甘油溶液，此液只供当天使用，气温高时仅半日有效。

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