阳性
细胞不是具体指哪一个细胞。每一个不同的实验中，所指的阳性细胞不同。比如，你一次培养出来的培养皿中有多种细胞，只有一种是你要的，那你就根据这种细胞的特性，找一种能将它染成特殊颜色的染料。就能把它筛选出来了。那么，被你染上色的细胞，就叫这个实验中的阳性细胞。t淋巴细胞亚群应用cd4和cd8单克隆抗体可将外周淋巴器官或外周血中的t细胞分为cd4+cd8-和cd4-cd8+两个主要的亚群。每个亚群按照某些表面标志和功能又可分为不同的功能亚群。（一）cd4阳性细胞群 1.th1和th2亚群 应用th细胞克隆培养技术和细胞因子产生的不同，已发现小鼠cd4阳性细胞群是一个不均一的亚群，可分为th1和th2，主要区别见表7-6。 th1细胞能合成il-2、ifn-γ、，lt、il-3、tnf-α和gm-csf，但不能合成il-4、iil-5、il-6、il-10和il-13；而th2能合成tnf-α、il-3、gm-csf、il-4、il-5、il-6、iil-10（细胞因子合成
抑制因子，csif）和il-13，不能合成il-2、ifn-γ和lt。此外th1和th2都能分泌三巨噬细胞炎症蛋白和前脑啡肽原。th1和th2都能辅助b合成抗体，但辅助的强度和性质不同。体外实验表明，il-4明显促进b细胞合成和分泌ige，如使lps刺激小鼠b细胞合成ige能力增强10-100倍。少量ifn-γ能完全阴断il-4对ige合成的促进作用。th2分泌il-4对ige合成有正调节作用，而th1分泌ifn-γ则起负调节作用。此外，th2通过分泌il-4和il-5辅助iga合成，分泌il-10（csif）,抑制th1细胞合成细胞因子，而th1对igg1合成则有抑制作用，但辅助其它几种类型ig的合成。由于th1和th2合成淋巴因子的种类不同，因而介导不同的超敏反应。il-3和il-4均能促进肥大细胞增殖，且相互有协同作用，il-5除辅助b细胞合成iga外，还能刺激骨髓嗜酸性粒细胞的集落形成，因而th2与速发型超敏反应关系密切。th1通过产生ifn-γ阻断ige合成，对速发型超敏反应有抑制作用。th1与迟发型超敏反应有关，可能与il-2、ifn-γ等对巨噬细胞活化和促进ctl分化作用有关，此外lt也有直接杀伤靶细胞作用。两群th克隆均能诱导
抗原提呈细胞（apc）表达mhcⅱ类抗原，th1通过ifn-γ诱导mφ表达ia抗原，而th2通过il-4对mφ和b细胞ia抗原表达起正调节作用。在人类th1和th2细胞亚群尚未得到最后证实。从目前发表资料来看，cd4+cd45ro+前体细胞向th2效应细胞分化，而ifn-γ则对前体细胞向th2分化过程起抑制作用，因此il-4和ifn-γ在决定cd4+cd45ro+前体细胞向th1或th2分化过程中起着重要的调节作用。人t细胞经多克隆活化后，在cd4阳性细胞中il-4mrna阳性比便不到5%，而60%的cd4+细胞有ifn-γ和il-2mrna的转录。 表7-6 小鼠th1和th2亚群的比较 th1 th2 合成淋巴因子种类 il-2 + - ifn-γ + - lt + - il-3 + + tnf-α + + gm-csf + + il-4 - + il-5 - + il-6 - + il-10 - + il-13 - + 辅助b细胞 + ++ 辅助ige合成 - + 促进肥大细胞增殖 - + 介导超敏反应类型 迟发型 速发型 促进ia表达细胞 mφ b，mφ 介导迟发型超敏反应（delayed type hypersensitivity,dth）的t细胞亚群称为tdth，表面标志cd3+cd4+cd8-，可能相当于小鼠的th1亚群。当曾被变应原致敏的tdth再次与变应原相遇后，可释放出多种细胞因子，参与迟发型（ⅳ型）超敏反应的发生。 表7-7 tdth释放细胞因子参与迟发型超敏反应 作用对象 细 胞 因 子 生物学活性 巨噬细胞 巨噬细胞趋化因子（mcf） 招引、聚集、活化巨噬细胞， 巨噬细胞移动抑制因子（mif） 增强巨噬细胞吞噬和杀伤功能 巨噬细胞活化因子（maf） ifn-γ 白细胞 白细胞移动抑制因子（lif） 招引、聚集白细胞 淋巴细胞 il-2 淋巴细胞局部浸润、增殖 ifn-γ 增强杀伤功能 皮肤血管 皮肤反应因子（srf） 增加血管通透性 靶细胞 淋巴毒素（lt） 杀伤靶细胞 mcf: macrophage chemotactic factormif: macrophage migration inhibition factor maf: macrophage activating factor lif: leukocyte migration inhibitory factor srf: skin reactive factor lt: lymphotoxin 2.抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群 应用cd45ra、cd45ro、cd29和cd31单克隆抗体可将cd4阳性细胞群分为抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群。两个亚群的表面标志和功能比较见表7-8。（1）cd31：最近发现cd31是一种新的、激活后表达水平不发生明显变化的抑制细胞诱导亚群的表面标记。cd31是一种血小板-内皮细胞胞粘附分子（pecam,gpⅱa），分子量为140kda，其结构属于免疫球蛋白超家族成员。从外周血新鲜分离的cd4细胞中，cd31mcab主要与cd45ra亚群反应，对b细胞合成igg辅助作用不明显，对cona和自身mhc（自身mlr）反应较为敏感；而cd31-的cd4细胞群中，发现有大量辅助b细胞合成igg的活性和对某些抗原刺激的回忆反应。cd45ra+的cd4细胞大激活后，尽管细胞表面丢失cd45ra，但表面cd31的表达仍不发生明显变化；而cd45ro+cd45ra-的cd4细胞激活后不能获得cd31表达。由于cd31在cd4细胞激活后仍不变化，对于鉴别抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群是一种有用的标志。迄今为止，许多粘附分子如 cd11a/cd18(lfa-1),lfa-3,cd2和cd29（vlaβ链）主要表达在cd45ro+t细胞表面。而cd31则表达在cd45ra+cd4细胞表面。抗cd31mcab作用于naive t细胞能触发其vla-4介导的粘附作用。内皮细胞表面cd31及其配体与t细胞表面cd31及其配体相互作用很可能触发整合素介导的粘附作用。cd31如何参与cd45ra+cd4+t细胞功能以及诱导抑制性t细胞产生还有待进一步研究。（2）cd45：cd45为异构型分子。cd45细胞膜外部多肽链可由a、b和c三种外显子编码。人幼稚t细胞只表达被抗cd45ra识别的cd45a型；记忆t细胞不表达任何a、b、c外显子产物而被抗cd45ro识别。抗cd45ra和抗cd45ro识别的都是休止型细胞，抗cd45ro所识别的记忆t细胞往往也可低水平表达一系列活化表面标记，如cd25、mhcⅱ类抗原、cd54、cd26等，提示这类细胞可能新近被激活过，由此推论记忆t细胞可能是由于持久性抗原或交叉抗原的低剂量、持续刺激得以维持其长时间存活。体外实验观察到细胞活化后见有从cd45ra向cd45ro的单向性转变，这与幼稚t细胞向记忆t细胞分化相平行。表7-8 抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群的比较 抑制细胞诱导亚群 辅助细胞诱导亚群 表 型 cd4 + +cd29 低密度 高密度cd31 + -cd45 cd45ra cd45ro粘附分子（lfa、icam） + +++ 增殖功能 cd2mcab + +++ cd3mcab + +++ cona +++ + 抗原刺激再次反应 - +++ 同种异体抗原 +++ +++ 自身mlc +++ + 诱导和辅助功能 辅助b细胞产生抗体 ± +++ 诱导ts +++ -诱导细胞介导的淋巴细胞溶解作用（cml） ± +++ 细胞发育阶段 天然（naive） 记忆（memory） （3）自身混合淋巴细胞反应：外周血b细胞和单核细胞等非t细胞在体外培养时能诱导某些自身t细胞发生增殖反应，称为自身混合淋巴细胞的应（autologous mixed lymphocyte reaction ,amlr）。这一部分t细胞称为自身反应性t细胞。作为刺激细胞的b细胞和单核细胞主要是通过其细胞表面的mhcⅱ类抗原来刺激自身反应性t细胞，在体外培养时加入抗mhcⅱ类抗原的抗体可阻断amlr。关玩弄amlr的生理意义尚不清楚，可能是机体的一种免疫调节机制。 （2）cd8阳性细胞群根据cd28阳性或阴性可将cd8+细胞分为细胞毒性t细胞（cd8+cd28+）和抑制性t细胞（cd28+cd28-）。cd28mcab能与60-80%t细胞发生反应，包括全部cd4细胞和部分cd8细胞。 1.tc(ctl) 在人类ctl表型为cd3+cd4-8+cd28+。小鼠ctl表型为thy-1+、lyt-1+、lyt-2+/lyt-3+。（1）ctl的分化：静止的ctl以前体细胞（precursor）(ctl-p)形式存在，外来抗原进入机体被抗原提呈细胞（apc）加工处理，形成外来抗原与apc自身mhc i类抗原的复合物，被相应ctl克隆细胞膜表面tcr/cd3所识别，抗原刺激信号和apc释放il-1共同存在的条件下，ctl-p被活化，并表达il-2r、il-4r、il-6r等多种细胞因子受体，在il-2、il-4、il-6、ifn-γ等细胞因子诱导下，迅速增殖，并分化为成熟的效应杀伤性t细胞（effector ctl）。ctl具有识别抗原的特异性，即能杀伤具有特定的外来抗原（如病毒感染靶细胞膜表面的病毒抗原）与自身mhc i类抗原结合的复合物的靶细胞。有关ctl杀伤靶细胞受到mhc i类抗原的限制，参见第五章“主要组织相容性复合体”第四节。从肿瘤组织周围分离获得的ctl称为肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte , til）。til在体外加il-2培养后，具有很高的杀伤肿瘤作用，目前已用于临床的肿瘤治疗。 （2）ctl的识别机制：多种粘附分子参与ctl对靶细胞的识别和粘附，主要有：①lfa-1/icam-1、icam-2、icam-3，可溶性icam-1（sicam-1）可抑制ctl杀伤肿瘤细胞；②cd2/lfa-3（cd58），抗cd2 mcab或抗cd58 mcab均可抑制ctl效应细胞对靶细胞的杀伤；③cd8/mhc i类抗原的非多态性结构域。 （3）ctl的杀伤机制：tcl杀伤靶细胞的机理目前认为主要通过释放多种的介质和因子介导的。 ①穿孔素（perforin）:又称成孔蛋白（pore-foming protein,pfp）、c9相关蛋白（c9 related protein）或溶细胞素（cytolysin），贮存于电子稠密胞浆颗粒（electron-densecytoplasmic granules），成熟的穿孔素分子由534个氨基酸残基组成，分子量为56-75kda，ip为6.4，穿孔素分子中央部位170-390之间的氨基酸序列与c9 328-560氨酸酸序列约有20%同源性，这个区域与穿孔素和c9的多聚化和以管状形式插入到细胞膜有关。在杀伤相时，ctl细胞脱颗粒，穿孔素从颗粒中释放，在ca2+存在下，插入靶细胞膜上，并多聚化形成管状的多聚穿孔素（polyperforin），约含12-16个穿孔素分子，分子量可达1000kda。多聚穿孔素在靶细胞膜上形成穿膜的管状结构，内径平均16nm。这种异常的通道使na+、水分进入靶细胞内，k+及大分子物质（如蛋白质）从靶细胞内流出，改变细胞渗透压，最终导致细胞溶解。此过程与补体介导的溶细胞过程类似，溶解细胞过程比较迅速。ctl本身可能释放a型硫酸软骨素蛋白聚糖（proteoglycans of chondroitinsulphate a type）、硫酸软骨素a限制因子（homologous restriction factor,hrf），因此可避免穿孔素对ctl自身细胞的攻击。 图7-3 ctl释放穿孔素杀伤靶细胞机理示意图 ②丝氨酸酯酶（serine estersse）:活化ctl释放多种丝氨酸酯酶，如ctla-1（又称ccp1或granzyme b）、ctla-3（又称h因子或granzyme a），其作用可能类似补体激活过程中的酯酶作用，通过活化穿孔素而促进杀伤作用。 ③淋巴毒素（lymphotoxin,lt）:又称肿瘤坏死因子-β（tnf-β），lt可直接杀伤靶细胞，但杀伤过程较慢，其杀伤机理参见第四章“细胞因子及其受体”第二节中肿瘤坏死因子。 2.ts和ts亚群 抑制性t细胞（suppressor t lymphocyte,ts）对免疫应答有重要的负调节功能，抑制性t细胞功能的异常，常与t自身免疫性疾病、第i型超敏反应等疾病发生有关。 （1）抑制性t细胞的证实：绵羊红细胞（sheep red blood cell , srbc）对于小鼠是良好的免疫原，合适剂量的srbc可诱导小鼠产生高效价的抗srbc抗体。当过高剂量srbc免疫小鼠时，则抗体合成水平反而明显下降，称为高剂量免疫耐受。动物实验研究发现，将高剂量免疫耐受小鼠脾细胞转移到免疫原剂量刺激的小鼠体内时，则小鼠抗体应答水平明显下降。如高剂量免疫耐受小鼠脾细胞经抗thy-1和补体处理后再转移到免疫原剂量免疫的小鼠体内，则高剂量免疫耐受小鼠脾细胞的抑制作用消失。实验证明了在高剂量免疫耐受小鼠的脾细胞中存在有抑制作用的t细胞。 表7-9 抑制性t细胞的证实 （1） 免疫原剂量---→抗体应答+++ srbs免疫小鼠 （2）高剂量srbc---------------------------------→抗体应答+ 免疫耐受小鼠 （3）高剂量免疫-→转移未处理脾细胞-→免疫原剂量-→抗体应答+ 耐受小鼠 免疫小鼠 （4）高剂量免疫-→转移抗thy-1+ ----→免疫原剂量-→抗体应答+++ 耐受小鼠 补体处理脾细胞 免疫小鼠 进一步研究证明，这种抑制细胞的表型为cd3+cd4-cd8+（小鼠cd8单抗常用lyt-2）。人的抑制性t细胞表型为cd3+cd4-cd8+cd28-。ts细胞不仅对b细胞合成和分泌抗体有抑制作用，而且对th辅助作用、迟发型超敏反应以及tc介导的细胞毒作用都有负调节作用。 (2)ts细胞的亚群：ts细胞还可分为ts1、ts2和ts3不同亚群，分别起着诱导抑制、转导抑制和发挥抑制效应的作用。它们之间相互作用的确切机理还不十分清楚，可能是通过释放可溶性介质相互作用的。ts1（tsi，抗原特异性抑制性t细胞）分泌tsf1（tsif，抑制诱导因子）→作用于ts2（tst，抑制转导细胞），分泌tsf2（tst f）→作用于ts3（tse，抑制效应细胞），分泌ts3f（tsef），作用于th细胞，通过对th的抑制作用，从而对各种免疫功能起负调节作用。ts细胞群具有高度异质性，除ts1 、ts2、ts3亚群外，还有一群反抑制性t细胞亚群（contra-suppressor t cel，tcsl）。tcs活化后分泌反抑制性t细胞因子tcsf，直接作用于th细胞，解除ts细胞的抑制作用，使th细胞恢复辅助活性。CD45存在于除红细胞和浆细胞以外的所有血细胞。它在T，B细胞上的不同作用是因为不同的CD45RA, CD45RB, CD45RC, CD45RAB, CD45RAC, CD45RBC, CD45R0, CD45R (ABC) 这些Isoform导致的这里又段文献，描述的很详细了CD45RA is located on naive T cells and CD45R0 is located on memory T cells. CD45 is also highly glycosylated. CD45R is the longest protein and migrates at 200 kDa when isolated from T cells. B cells also express CD45R with heavier glycosylation, bringing the molecular weight to 220 kDa, hence the name B220B cell isoform of 220 kDa. B220 expression is not restricted to B cells and can also be expressed on activated T cells, on a subset of dendritic cells and other antigen presenting cells.Naive T lymphocytes express large CD45 isoforms and are usually positive for CD45RA. Activated and memory T lymphocytes express the shortest CD45 isoform, CD45R0, which lacks RA, RB and RC exons. This shortest isoform facilitates T cell activation.The cytoplasmic domain of CD45 is one of the largest known and it has an intrinsic phosphatase activity that removes an inhibitory phosphate group on a tyrosine kinase called Lck (in T cells) or Lyn/Fyn/Lck (in B cells) and activates it.
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