NK细胞简介

1.NK细胞简介

NK细胞又称自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)，是机体内重要的免疫细胞，NK细胞形态上属于大颗粒淋巴细胞，来源于骨髓，是除T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞，约占血液中所有免疫细胞（白细胞数量）的15%，属于天然免疫系统的核心细胞，主要分布于外周血、肝脏和脾脏，在人体内NK细胞主要特征为 CD3-CD56+ 淋巴细胞群，其中血液中主要为 CD16+CD56dim 亚型（根据细胞上CD56分子表达密度的差异，将NK细胞分为CD56dim和CD56bright两个亚群；CD56dim占NK细胞90％以上，主要为细胞毒作用，表达中度亲和力的IL-2受体（IL-2R），具有更强的杀伤活性；CD56bright可产生大量细胞因子，主要起免疫调节作用，高表达IL-2R）。

NK细胞是体内负责杀伤老化、受病毒感染、肿瘤等异常细胞的最主要“战士”。NK细胞与人体其他150多种白细胞都不同，它不需要接受免疫系统的特殊指令，也不需要其他细胞的配合，自己单独就能识别和攻击外来细胞、癌细胞和病毒。循环的NK细胞通常处于休眠状态，一旦被激活，它们会渗透到组织中，分泌穿孔素及肿瘤坏死因子，攻击肿瘤细胞和病毒感染细胞

NK细胞是人体抵抗癌细胞和病毒感染的第一道防线，可非特异性直接杀伤肿瘤细胞，这种天然杀伤活性既不需要抗原致敏，也不需要抗体参与，且无 MHC限制 。除了具有强大的杀伤功能外，还具有很强的免疫调节功能，与机体其他多种免疫细胞相互作用，调节机体的免疫状态和免疫功能。临床研究发现 NK细胞过继免疫治疗 恶性肿瘤具有良好的应用前景，对多种实体瘤和血液系统恶性肿瘤均有一定效果。

2.****NK细胞表面受体

NK细胞识别自我与非我并不需要体细胞基因重排产生识别不同抗原的克隆，而是表达多种受体执行功能。

NK细胞受体主要包括免疫球蛋白超家族（如KIR），C型凝集素家族如NKG2受体，天然细胞毒性受体（NCR）：NKp46、NKp44和NKp30，下表例举主要的受体及其调节功能：

3.****NK细胞的作用机制

NK可释放穿孔素、颗粒酶，穿孔素在靶细胞表面穿孔，使颗粒酶b进入靶细胞诱导靶细胞凋亡。同时分泌大量的细胞因子，如ifn-v、tnf-x、gm-csf、il-3、m-csf等，直接作用于靶细胞，或通过进一步激活其他种类免疫细胞攻击靶细胞。并可表达可以诱导细胞凋亡的蛋白（fasl）和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（trail），使靶细胞进入程序性凋亡状态。

NK细胞治疗流程

NK细胞的“动态平衡”状态受细胞表面多种受体蛋白的调控，简言之，分为2类：杀伤细胞活化受体（KAR）和杀伤细胞抑制受体（KIR）。

图a. 正常情况下，KAR与自身细胞上多糖类抗原结合产生活化信号，同时KIR与MHC I类分子结合，产生抑制信号且占主导地位，以保证自身组织细胞不被破坏，阻止NK对自身健康细胞的杀伤。

图b. 当细胞表面MHC I类分子发生改变或减少缺失（肿瘤细胞或其他损伤的细胞为逃逸获得性免疫追杀而下调MHC消除抑制信号），影响与KIR结合，不能产生抑制性信号，NK则活化，释放溶解性颗粒产生杀伤效应(MHC I丢失自我) 。

图c. 即使存在抑制信号，肿瘤细胞亦可通过过表达表面抗原与KAR结合，肿瘤细胞可以通过激活NK细胞受体来表达被诱导的应激配体，此时活化信号超过抑制信号，继而激活NK细胞杀伤靶细胞。

图d. NK细胞还表达IgG1和IgG3的低亲和力受体FcγRIII（CD16），可与肿瘤抗原特异性抗体Fc段结合，介导NK细胞识别并杀伤被抗体包被的肿瘤细胞，亦称为抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（antibody dependentcell-mediated cytotoxicity, ADCC），ADCC也是NK细胞杀伤靶细胞的主要方式。

目前认为NK细胞主要通过以下途径发挥杀伤作用：

1.NK细胞直接通过胞吐作用释放穿孔素和颗粒酶等细胞毒性颗粒，活化半胱天冬酶（caspase）途径诱导靶细胞凋亡；

2.活化NK细胞表达Fas（CD95）配体和TRAIL（TNF related apoptosis inducing ligand，肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体）分子，诱导CD95+靶细胞和TRAIL受体阳性的靶细胞通过内源酶的级联反应发生凋亡；

3.细胞因子介导的杀伤作用，NK细胞能合成和分泌多种细胞因子，如IFNγ、TNFα、IL1、IL5、IL8、IL10和GCSF；

4. ADCC作用。

4.****NK细胞如何发挥治疗作用？

鉴于NK细胞自身的作用机制，在肿瘤免疫治疗中，主要通过以下策略来促使NK细胞发挥最大的作用：

1，免疫检查点抑制剂，解除NK细胞的抑制信号；

2，使用NK细胞进行癌症治疗；

3，嵌合抗原受体（CAR）技术与NK细胞结合；

4，双特异性分子联结NK细胞活化受体和肿瘤细胞。

图a. 某些激活的NK细胞表达PD1和CTLA4。研究者在多发性骨髓瘤患者体内检测到其NK细胞表达PD1，应用PD1单抗（CT-011）后能修复NK细胞介导的抗肿瘤效应；此外，应用PDL1的IgG1单抗还可能激发NK细胞的ADCC。NK细胞表面KIR类的抑制性受体（KIR2DL1, KIR2DL2 和KIR2DL3）可与MHC I类分子结合，抑制NK细胞活化，体外实验表明，应用IPH2102单抗阻断KIR2DL1-3，可以增加NK细胞的抗肿瘤活性（作用机制图a所示）。在AML和MM的临床I－II期研究已证实anti-KIR的安全性，虽然目前anti-KIR单独应用没有展示出显著的抗肿瘤效应，然而其与CTLA4或PD1抑制剂联用值得期待。

图b. 在杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIRs)和主要组织相容性复合体(MHC)的出现供体与受体之间不匹配情况下，通过抑制NK细胞的KIRs对不识别MHC类I分子表达的转移的同种异体肿瘤细胞，进而杀伤肿瘤细胞。

图c. CRA-T大家都耳熟能详，模仿CAR-T的CAR技术，已研发出CAR-engineered NK cell（如图c所示），其原理亦是通过在NK细胞表面嵌合肿瘤特异性抗原受体，靶向识别并摧毁肿瘤细胞。体外实验提示，其CAR-engineered NK cell展示出较ADCC更强的细胞毒作用，可能与CAR与肿瘤表面抗原结合较IgG-CD16展示出更强的亲和力,目前CAR-engineered NK cell还处于研发阶段，期待其在体内试验中的疗效。

图d. 以NK细胞表面活化受体CD16和NKG2D为靶点的双特异性分子，可以靶向NK细胞识别并杀伤肿瘤细胞。（双特异性分子被设计用来识别激活NK细胞受体结合另一端的肿瘤抗原，以使NK细胞杀灭过度表达这些抗原的肿瘤细胞）

利用NK细胞潜能的治疗方法示意图

NK细胞在免疫监视中扮演着非常重要的角色，随着对NK细胞的分子特征和功能的进一步探索，开发以NK细胞为基础的靶向免疫治疗可能引发肿瘤免疫治疗的新突破，以NK为基础的潜在免疫治疗靶点。

5.****肿瘤细胞如何逃逸NK细胞攻击？

如图所示，肿瘤细胞主要通过以下途径逃逸NK细胞攻击：

a.血小板包被肿瘤细胞，并释放TGF-β等免疫抑制因子，表达GITR配体与KIR结合或下调KAR，抑制NK细胞激活；

b.肿瘤细胞分泌免疫调节分子，如PGE2、IDO、TGF-β和IL-10等；

c. 肿瘤细胞分泌可溶性NKG2DL，中和NK细胞表面受体；

d.肿瘤微环境中基质细胞等分泌免疫抑制因子，表达NKG2DL，下调NK细胞表面受体。

肿瘤细胞逃逸NK细胞机制

本文转自干细胞者说

人体有一个强大的 免疫军团 ，储备着大量的精兵，时刻保护着我们，使我们远离癌症的侵袭。我们体内的 免疫战斗 和电影中演绎的抗敌战争如出一辙，像一场接力赛一样，需要三支大军明确分工，制定缜密的作战计划， 协同作战，一举歼灭敌人 。

而在与癌细胞较量这场战争中，首当其冲的是 NK细胞 。 NK细胞是人体免疫系统的核心细胞，中文名称为自然杀伤细胞（natural killer，NK）。它的杀伤活性无MHC限制，不依赖抗体，因此称为自然杀伤能力，能够第一时间抑制病毒和细菌的侵入，清除体内癌变、病变及衰老细胞，具有延缓机体衰老的功能，是医学界公认的 “抗癌第一道防线” 。

NK细胞在体内游走一周，只需要6分钟。一天24小时，NK细胞可以循环240圈。NK细胞一旦发现癌细胞、细菌、 病毒的踪迹，即可在5分钟内将癌细胞、 细菌、病毒歼灭， 高效密集的保卫我们的身体不受侵害。

NK免疫细胞作用

免疫监视： NK免疫细胞能清除病变或癌变细胞，执行免疫监视

免疫防御： NK免疫细胞会抵抗外来细菌和病毒，执行免疫防卸

免疫自稳： NK免疫细胞能维持机体自稳状态实现免疫自稳

免疫军团的特种部队

NK细胞存在于人的血液当中，它就像是一直在 体内执勤的巡警 ，随着血液到处跑。在巡逻时，一旦发现体内出现异常细胞，会马上 稳、准、狠 的在第一时间处理掉。他们在T细胞部署之前攻击并在靶细胞膜上释放含有穿孔素和颗粒酶的细胞毒性颗粒，引发癌细胞自我毁灭。它们还可以 消除体内循环的癌症干细胞，有助于预防转移 。

尽管他们可以迅速进行防御并直接攻击肿瘤细胞，但NK细胞只是免疫系统的一小部分，仅占白细胞的10％。并且研究发现，人类到了25岁以后， 免疫力下降，NK细胞数量变得更少 。 特别是在40~50岁后，NK细胞的数量及功能显著下降， 使机体 没有足够的兵力（NK细胞、T细胞）去消灭癌细胞 ，癌症发病率便随之增加。

近年来，细胞免疫疗法已成为未来治愈癌症的新希望。 因为 最强大的抗癌力量 ，不是来自药物，也不是手术或者放化疗，而是我们 自身强大的免疫系统 。

为了提高体内NK细胞的活性及数量，科学家开发了能在体外使细胞亿万倍扩增的方法。通过抽取50ml人体外周血液， 把极少量的NK细胞分离出来再扩增培养 ，使其数量增加到原来的近万倍，数量达到50亿-100亿个；再 回输体内 ，大量的NK细胞会随着血液全身循环数千次，把体内的癌细胞，老化细胞，病变细胞，细菌病毒等杀灭， 从而达到 防癌抗癌 ，提升免疫力，延长生存期的目的。

提前储存，未来保障

美国疾病控制中心（CDC）报告显示， 几乎所有疾病的产生都与免疫细胞活性明显不足有关 。通过定期回输激活后的NK免疫细胞，能有效帮助人体对抗疾病，达到《黄帝内经》中治疗“未病”的效果。

癌症的发生与免疫功能下降有着密不可分的联系，因此，癌症治疗也应该以免疫重建为前提，提高免疫细胞的活性及数量，使其恢复对抗癌症的能力，从癌症发生的根本原因进行治疗。

对于免疫力比健康人群更弱的癌症患者， 强化免疫力 更是迫在眉睫又任重道远。免疫细胞越年轻，其免疫活性越好，今天的免疫细胞肯定比明天的年轻。所以，当下即是您储存免疫细胞的最佳时期。

提前储存免疫细胞 。当我们需要时，再将冻存的细胞取出、培养、扩增，使之成为一支年轻的、充满活力的免疫细胞特种部队。最后定期进行 免疫细胞保健 ，便可以起到 延缓衰老，改善亚健康，降低肿瘤发病风险 等多种作用。

提前存储年轻或健康时的NK细胞，为未来提供一份生命健康保障！

自然杀伤细胞，又称NK细胞，属于大颗粒淋巴细胞，来源于骨髓，占外周血淋巴细胞总数的5%-10%。它是机体重要的免疫细胞，具有广谱的抗肿瘤细胞作用，且不依赖于抗原刺激，就可以非特异性的直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞，对肺癌、肝癌、卵巢癌、食道癌、结肠癌、胃癌、宫颈癌等均有效果。以NK细胞为中心的巨噬细胞，24小时加以监视，一旦发现癌细胞就陆续加以清除，特别是对造血系统来源的肿瘤细胞更为敏感，如淋巴瘤，白血病。

---