什么是“四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)”?

什么是“四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)”?,第1张

“四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)”,即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法。MTT是一种噻唑盐,化学名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液为黄橙色。小鼠脾细胞受到ConA作用后发生增殖活化,其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高,MTT作为其底物参与反应,形成蓝色的甲臜(Formazan)颗粒沉积于细胞内或细胞周围,经盐酸—异丙醇溶解后为蓝色溶液,可用酶标测定仪测定细胞培养物的OD值,测定波长570nm。根据OD值的大小计算反应体系中细胞增殖程度。

目前MTT法常用于以下几个方面的研究:

1、检测细胞活性:常作为细胞毒性试验的一种方法。

2、体外药物敏感实验:该方法简便、经济、快速,重复性好,所需的细胞数较少,目前广泛的用于临床前的抗癌药物的筛选研究。

3、一些细胞因子活性的研究。

检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

(1)单细胞悬液接种于96孔培养板;103-104细胞/孔,每孔培养基总量200微升(96孔培养板每孔容积370微升),37℃、5%。

CO2培养箱中培养一段时间(根据实验目的决定培养时间)。

(2)加入2毫克/毫升的MTT液(50微升/孔);继续培养3小时。

(3)吸出孔内培养液后,加入DMSO液(150微升/孔),将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟,使结晶物溶解。

(4)酶标仪检测各孔OD值(检测波长570纳米)。记录结果,绘制。

扩展资料:

MTT为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下,外源性MT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒( Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。

二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在570nm(参比波长630m)波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MT结晶形成的量与活细胞数成正比。

参考资料来源:百度百科-MTT法


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