纸色谱是以滤纸作为支持物的。滤纸纤维与水有较强的亲和力，能吸收22%左右的水，其中6%～7%的水是以氢键形式与纤维素的羟基结合。由于滤纸纤维与极性小的有机溶剂的亲和力很弱，故而在分离时，以滤纸纤维及其结合的水作为固定相，以有机溶剂作为流动相。纸色谱对混合物进行分离时，发生两种作用：第一种是溶质在结合于纤维上的水与流过滤纸的有机相进行分配（即液—液分离）；第二种是滤纸纤维对溶质的吸附及溶质溶解于流动相的不同分配比进行分配（即固—液分配）。显然混合物的彼此分离是这两种因素共同作用的结果。
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