细胞裂解液该加多少

12孔板加100－200ul确实偏多，我为了减少上样体积、增加上样量，一般是先将细胞消化下来，然后一个50ml的培养瓶细胞沉淀加100－200ul的细胞裂解液，这样提出的蛋白一般是5-10ug/ul。如果使用直接裂解法的话，12孔板应该可以只用50ul，或者更少，你可以试一下，只要裂解液能覆盖所有细胞即可，再用枪头小心吹打以促进裂解液与细胞充分接触即可。但本人认为先消化收集细胞再裂解，对于需要高浓度蛋白相对比较好。

制备细胞裂解产物：

1、800g 4℃离心5 分钟，收集细胞，估计细胞离心后的体积(PCV,106 cells ≈ 20ul PCV,

107 cells ≈ 100 ul PCV)

2、每50~100ul PCV 加入5 倍体积的蛋白裂解液（250~500ul）,冰浴中放置10 分钟，且每隔5

分钟在漩涡混合仪震荡30 秒；

3、12000g 4℃离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；

4、假如所得蛋白产物较为粘稠，可95℃加热5 分钟，然后迅速冰浴5 分钟，12000g 4℃离心

10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。

制备组织裂解产物：

1、取50-100mg 组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS 洗涤2 次，离心弃去PBS；

2、加入0.5-1ml 预冷的蛋白裂解液；

3、4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40 次，直到95%的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10 分钟，且每

隔5 分钟在漩涡混合仪震荡30 秒；

4、12000g 4℃离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；

5、假如所得蛋白产物较为粘稠，可95℃加热5 分钟，然后迅速冰浴5 分钟，12000g 4℃离心

10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物。

6、20%的甘油保存于-70℃或-20℃。

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