用化学诱变剂处理过的细菌,为什么要用缓冲液来制备菌悬液?

宝宝妈妈2023-04-03  43

应该是方便后续的筛选,处理成悬浮的单细胞悬液使有发生变异和没有发生变异的细胞分开,在涂布平板可分开成单个细胞的纯的菌落,以防之后筛选出现不纯的菌落,如果将这种不纯的菌落进行育种,传代后很快会出现性状的衰退。

还有就可能化学诱变剂有毒性,长时间接触致死率会过高,处理一段时间后要稀释

希望对你有帮助

1、待霉菌产孢时,向斜面试管加入5mL无菌水,把孢子刮下,倒入已灭菌的三角瓶;

2、向三角瓶中加入表面活性剂;

3、将三角瓶放入摇床振荡1.5h,使孢子活化;

4、然后在3500r/min离心15min,用PH7.2磷酸缓冲洗涤一次,再用缓冲液5mL洗转入小三角瓶内(瓶中预先放置数粒无菌玻璃球),振荡10min,使孢子分散;

5、将分散的孢子液用四层灭菌的擦镜纸过滤,制成单孢子悬液;

6、镜检。

若发现其中存在孢子囊或菌丝,则向里加入蜗牛酶、几丁质酶,充分振荡,使孢子囊溶解,再用四层灭菌的擦镜纸过滤。再镜检

若未发现孢子囊或菌丝,则放置待用。

把现在制成单孢子悬液称为原浓度单孢子悬液。

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拿个EP管称重归零,再用枪头挑取菌落到EP管里头,然后称重。

到了10mg就加1ml无菌水混匀。

目测一下浑浊度,以后制备就目测下浑浊度就好了,不用称,没必要那么准确。


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