美国基因泰克公司的公司历史

《商业周刊》：“1980年，基因工程技术公司上市，一个小时内每股从35美元剧涨至88美元，公司的身价因此激增至3500万美元。这一事件是美国股市涨幅最大的案例之一。”

Genentech，即基因工程技术公司，成立于1976年，创始人是风险投资家罗伯特·斯万森（Robert A.Swanson）和生物化学家赫伯·玻伊尔博士（Dr.Herbert　W.Boyer）。20世纪70年代早期，玻意尔（Boyer）和遗传学家史丹尼·科恩（Stanley　Cohen）开创了一个名为DNA重组技术的科学新领域。斯万森（Swanson）为这一突破激动不已，他打电话给玻意尔请求会晤。玻意尔同意给这位年轻的创业者十分钟的时间。斯万森对这一技术的热心和对其商用前景的坚定信念是富有感染力的，会晤由10分钟延长到了3个小时：其结果是，基因工程技术公司宣布诞生。

尽管学术界和商界都对斯万森和玻意尔表示怀疑，他们俩还是坚定不疑地把自己的想法付诸实现。在短短几年的时间内他们就证明了持异议者的错误。这里可以回顾一下Genentech公司的发展史。 1976年，斯万森和玻意尔于4月7日创立基因工程技术公司。

1977年，基因工程技术公司通过微生物（大肠杆菌）首次制造出人体蛋白（生长激素抑制素）。

1978年，人工胰岛素由基因工程技术公司的科学家们合成。 1980年，基因工程技术公司上市，一个小时内每股从35美元剧涨至88美元，公司的身价因此激增至3500万美元。这一事件是股市涨幅最大的案例之一。

1982年，第一种DNA重组药品市场化：人工胰岛素。（Eli　Lilly　and　Company得到特许权。）

1984年，凝血因子Ⅷ——抗血友病因子的实验室产品问世。基因工程技术公司授予Cutter　Biological公司凝血因子Ⅷ全球生产和销售的特许权。

1985年，基因工程技术公司从美国食品和药物管理会（FDA）获得许可，把它的第一项产品——Protropin（R）（注射用促生长素）推向市场。这是一种用于治疗儿童生长素匮乏症的生长素。这也是由生物技术公司第一例生产和销售的利用DNA重组技术制药产品。

1986年，基因工程技术公司以Roferon（R）-A的商标授权Hoffmann-La　Roche公司的干扰素α-2从FDA获准用于毛状细胞白血病治疗。基因工程技术公司启动非保险计划，为美国没有保险的贫穷病人提供免费的人体生长素。

1987年，基因工程技术公司从FDA获准将Activase（R）（Alteplase，重组体）推向市场，这是一种组织——血纤维蛋白溶酶原激活素（t-PA），可溶解心脏病人突发心肌梗塞时形成的血块。

1988年，基因工程技术公司的非保险计划的范围扩大到了Activase。

1989年，基因工程技术公司开放了托儿中心“基因工程技术公司的下一代（Genentech’s　Second　Generation）”，这是美国最大的公司下属托儿中心之一。基因工程技术公司经FDA批准将Activase市场化，用于急性大块肺血栓的治疗。基因工程技术公司和瑞士的贝赛尔罗西有限公司完成了21亿美元的兼并。 1991年，两家日本的t-PA特许权获得商开始这一产品在日本的销售。

1992年，基因工程技术公司和罗西公司公布了在欧洲各主要国家合作开发、注册和销售Pulmozyme（R）（链道酶α，重组体）吸收液的协议。基因工程技术公司和罗西公司进入了以下领域的研发合作：基于生物技术的罗西化学图书馆自动检索系统，以鉴定备选新药。一种基于肿瘤坏子因子（TNF）摄取体的特制蛋白质。基因工程技术公司投入使用了全球最大的生物技术研究机构——创建者研究中心。中心的荣誉被献给创建者Robert　Swanson和 Dr.Herbert　Boyer，以褒扬他们全心追求生物技术事业发展的眼光和决心。

1993年，基因工程技术公司将FDA批准将Nutropin（R）[以核糖体DNA为复制起点的注射用促生长素]市场化，这种产品用于儿童慢性肾亏患者在植肾前的治疗。基因工程技术公司建立了基因工程技术公司生长发育基金会，这是一个独立的非营利性机构，宗旨是为了推动人们对儿童成长发育的了解，鼓励开业医生和护士从事研究，为他们创造以前不具备的机会。

基因工程技术公司从美国、加拿大、瑞典和新泽西的统销商处获得销售用于治疗胆囊纤维症的Pulmozyme的许可。基因工程技术公司的凝血因子Ⅷ ——1984年授Miles公司以特许权（之前是Cutter　Biological）——经FDA批准用于血友病A的治疗。基因工程技术公司的牛生长素 ——授Monsanto公司以特许权并以Posilac的品名分销的——获得了FDA许可。Gusto（对冠动脉闭塞症的链霉素和t-Pa全球使用）试验表明，在对41，000例病人的试验中，Activase与4号肝膦脂混合快速注入比之单独注射链霉素（Kabikinase牌），能将心脏病人的死亡率降低14%。基因工程技术公司公布了针对Wellcome基金会的永久性条令，在基因工程技术公司的专利限2005年到期之前禁止Wellcome在美国销售t-PA。基因工程技术公司启动了Access　Excellence，一项耗资100万美元的全国通讯网络工程项目，为使全国的高中生物教师可以与专家和他们的同事建立联系。

1994年，基因工程技术公司引入了“Pulmozyme病人保证”以确保美国每一位需要Pulmozyme及其相关设备并有资格的胆囊纤维症病人能获得之，确保公司在胆囊纤维症方面的研究继续保持不懈的步伐。基因工程技术公司宣布它将把耗资1亿5千万美元的新工厂建在加里福尼亚州的 Vacaville。基因工程技术公司和Eli　Lilly　and　Company解决了所有悬而未决的专利侵权、违反合同和相关要求权问题，结束了关于重组人体生长素的长期争端。基因工程技术公司与Alkermes公司达成协议，发展基因工程技术公司两种蛋白质的持久释放过程研究，这两种蛋白质都用到了Alkermes专有的ProLease（r）微封装技术。基因工程技术公司与IDEC　Pharmaceuticals达成开发IDEC的anti- CD20单克隆抗体C2B8的协议，这一产品用于治疗非霍德金B细胞淋巴瘤。公司获得FDA的许可，将Activase的一种快速注入疗法上市。基因工程技术公司与Roche　Holding，Ltd.签署了协议，延长了Roche以每股高出1/4达到82.5美元的先决价购买公司可偿还普通股的4年选择权。作为协议的一部分，基因工程技术公司开始因Roche为这些产品的销售负责而从Pulmozyme在欧洲以及所有基因工程技术公司产品在加拿大的销售中获专利。

1996年：公司庆祝成立20周年纪念。公司经FDA批准将Nutropin　AQ（R）（以核糖体DNA为复制起点的注射用促生长素。）上市，这是第一种和惟一的一种液体（水成）重组人体生长素，用于在移肾前期治疗患慢性肾亏儿童的生长缺陷，也可用于儿童生长荷尔蒙不平衡的治疗。公司获FDA批准将治疗急性局部缺血症和脑溢血的Activase上市。公司经FDA批准将治疗矮身材及Turner并发症的Nutropin上市。公司经FDA批准将治疗病情恶化的胆囊纤维症病人的Pulmozyme上市。

1997年，公司及其合作伙伴partner　IDEC　Pharmaceuticals，Inc.经FDA批准将Rituxan（R）（Rituximab）上市，用于复发及难治的低等或小囊泡CD20非霍德金B细胞淋巴瘤病人的治疗。公司经FDA批准将Nutropin　AQ上市，用于治疗矮身材并发Turner症。公司经FDA批准将Nutropin和Nutropin　AQ上市，用于成人生长素匮乏症的治疗。公司为生长素病人、肿瘤病患者及他们的医生启动了一项称为SPOC（单点接触）的服务，以提供为顾客考虑的偿还援助。公司与Alteon，Inc.就Pimagedine的进一步开发和行销签定协议。Pimagedine是一种高级糖基化作用终产物（A.G.E.）结构止氧剂，目前正处于第三临床试验阶段，用于糖尿病患者的肾治疗。协议还包括对目前正处于临床前开发阶段的第二代A.G.E.结构止氧剂的权利。公司与LeukoSite，Inc.就LeukoSite的LDP- 02的开发和商业化签定协议，这是一种用于治疗肠炎的人工单克隆抗体。公司与Incyte　Pharmaceuticals，Inc.就Incyte的 LifeSeq（Tm）的DNA排列次序和基因表现信息库使用签定协议。

公司用重组体人造凝血因子Ⅷ治疗血友病的技术及重组体人造凝血因子Ⅷ制药技术被授予专利。相应地，1991年在欧洲的专利也被授予。作为对基因工程技术公司在本市创建生物技术工业的杰出贡献的认可，旧金山市以“DNA路”将Point　San　Bruno大道的400个街区重新命名，并将基因工程技术公司在新大道的地址定为“DNA路1号”。

1998年，基因工程技术公司经FDA许可，改换Pulmozyme的商标，包括对5岁以下的胆囊纤维症患者使用Pulmozyme的安全和变通管理方式。基因工程技术公司获得了关于t-Pa的变异体的两项新专利。公司向Centecor，Inc.提起专利侵权诉讼，指责Centecor公司在美国的Retevase（Reteplase，重组体）t-PA销售、销售报价、使用和进口行为侵犯了基因工程技术公司的这两项新专利。基因工程技术公司寻求永久性的法令保护和损失赔偿。基因工程技术公司同意提供Sumitomo制药有限公司在日本开发、进口和分销Nutropin　AQ和ProLease封装的持续释放人体生长素。基因工程技术公司授权Connetics公司在美国销售控制慢性肉芽瘤病用Actimmune，以及这一产品的其它性能的美国地区开发和商业化权利。基因工程技术公司提交专卖申请，请求将Herceptin（R）（trastuzumab）上市，用于恶性乳腺癌的治疗。 Herceptin获得了FDA的快速跟踪产品指定，这一指定可以保证寻求市场开拓的专卖申请项得到及时的审查。基因工程技术公司与DAKO签定协议， DAKO可据此开发一套体外诊断设备，可用于甄别由某种称为HER2的生长素摄取体分泌过多引起的乳腺癌患者，DAKO还有权就人工单克隆抗体对 HER2，Herceptin的治疗与基因工程技术公司进行后继合作。

基因工程公司在它的发展过程中，不断地开发新的产品和技术，力图保持技术优势和竞争优势。生物技术是具有很大前景的产业。在世界经济的大圆盘中生物技术相对于信息技术产业来说可谓微不足道。生物医学不像IT产业，它具有投资期限长的特点。但是，真正有眼光的投资家，特别是风险投资家，以及生物医学界的创业者都不会放弃这块充满机遇和挑战的天地。罗伯特·斯万森和赫伯·玻伊尔就是其中一对很好的合作伙伴。 罗伯特·斯万森（Robert　Swanson）（1947-）

概要

在生物技术发展史上一位风险投资家留下了什么呢？为了创立企业，使药品最终能为需要的人们获得，风险投资，也许更为重要的是商业头脑和创造性，是基因工程技术本身强有力而必不可少的伙伴。

生涯

那年罗伯特·斯万森仅27岁，供职于硅谷一家最有影响力、最成功的风险投资公司，他开始考虑实验室那些被好奇地刺戳摆弄的细胞中埋藏着的黄金。这些实验室遍布世界各地，更吸引人的是，也许就在他自家的后院呢？他四处寻找，与各方面他认为能启发他从微生物学那些激动人心的发展中寻找商机的人会晤。他的教育背景给了他从事这一事业的有力保证。他拥有MIT化学学士学位及MIT斯隆商学院的硕士学位。他还曾担任了4年Citibank的投资总监。

但斯万森只是在这些朦胧的意识中苦思，而没有明确精深的知识。他没有预料到随意安排的一次和UCSF（加州大学旧金山分校）一位科学家的拜访会把已经将遗传控制的可能性转化为一项颇具市场潜力的技术的那个人带到他面前。科学事业和商业都有一条亘古真理——机遇总是与最敏捷的头脑相随——而这正是斯万森无法否认的素质。当他安排这一会晤之时，他记起了自己在基因工程这一刚具雏形的科学领域孤注一掷的决心，预备离开在Kleiner Perkins的舒适工作，将自己所有的鸡蛋都放到刚起步的公司这一个篮子里去。

1975年的这次会晤，后被证明是斯万森及其他许多从基因工程的商业化获益的人们事业和生命的里程碑。当时对UCSF工作过度、资金不足的赫伯特· 玻意尔来说是刺激的。正如斯万森的回忆：“所有我打电话找到的那些学者都说基因分离的商业应用还有10年之久，赫伯特没有。”斯万森的眼光和热情深深地打动了玻意尔，两人边吃三明治喝着啤酒，畅想着未来，长达数小时。尽管已经成功地追求到了科学，玻意尔还没有被拉入到对生意和创业合作的追求中来，因为斯万森还仅是一个毛头小伙。

1976年春天，斯万森还没有使玻意尔确信开创公司已万事俱备，但他已经说服了他的老板托马斯·帕金斯。帕金斯拿出了种子基金，斯万森认真地着手，以分子生物学的原理将企业的资金、目标和投资回报等结合到一起，这被证明是他非常擅长的一项工作。公司首先着眼于人胰岛素的合成，这一工作由基因工程技术公司的科学家们在1978年完成。把这一技术的特许权授以Lilly公司之后，基因工程技术公司于1985年成为首家推出自己的生物医药制品——人体生长素。基因工程技术公司自此奠定了它在生物技术工业和保健行业的领袖地位——一个异常成功的商业和科研机构。

职务

斯万森自公司创始之日起一直担任公司的董事和总裁，直至1990年他被任命为董事长。与他热爱运动的合伙人赫伯特·玻意尔不同，斯万森的业余爱好倾向于艺术一类。除了在各专业委员会的一长串头衔外，斯万森还是一位艺术事业的惠顾者，同时任职于旧金山芭蕾委员会和现代艺术博物馆委员会。 概要

赫伯·玻伊尔（Herbert　Boyer）

赫伯特·玻意尔1936年出生于西宾夕法尼亚州的一个偏僻乡村，并在那里长大。那里大多数年轻人的最终归宿是铁路公司和矿务局。读完高中后，玻意尔继续在附近Latrobe的圣·文森特专科学校求学，一边住在家中准备医药预科的课程。在高中以前，显然，他不可能从培养医生的寻常模式中取捷径。在医生这一职业的短暂诱惑中，这时他还没有发现自己会被深深吸引到研究工作中不可自拔，玻意尔的事业生涯和许多其他作为先驱的分子生物学家迥异。

生涯

1958年玻意尔从圣·文森特专科学校获得生物学和化学的学士学位，1959年和Grace结婚。研究生阶段的工作是1963年在匹兹堡大学完成的，之后他又在耶鲁做了3年博士后研究生。当生物化学、蛋白质化学和酶学吸引他的注意力时，他参加了当时风行全国的公民权利运动。

1966年，玻意尔向西迈进，自然地申请了旧金山加州大学的助教之职。1969年，一种普通的内脏细菌——大肠杆菌，引起了他的注意——特别是大肠杆菌中一些具有特别有用性质的抑制酶。玻意尔发现这些酶具有以一种特殊的形式将DNA链切断的能力，这使得在DNA链上留下了所称的“粘端”。这些经过剪切的端头通过精确的运动将DNA碎片粘贴到一起。

因这一发现，玻意尔在夏威夷的某次会议中和斯坦福一位名为Stanley　Cohen的科学家进行了一次交谈。Cohen当时正在研究DNA中被称为质粒的小环结构，这一结构能在某些细菌细胞的细胞质中自由流动，通过DNA链译码独立地自我复制。Cohen开发了一套从细胞中分离这些质粒、将它们植入其他细胞的技术。将这一过程与DNA分裂结合，Boyer和Cohen就可以将DNA段组合成需要的结构，并将之植入细菌细胞中，这就能使植物生产满足特殊需要的蛋白质了。这一突破是生物技术工业建立的基石。

1975年，当时受雇于硅谷最大的一家风险投资公司的一位名叫Robert　Swanson的年轻人，看到了新兴的生物技术的前景而来和Boyer 接触。随之而来的两人之间的对话开阔了Boyer的视野，使他看到了用细胞作为“工厂”制造激素来生产激素的可观商业潜力。1976年，两人合作创立了 Genentech（基因工程技术公司）并着眼于人体胰岛素的人工合成，这一目标由基因工程技术公司的科学家们在1978年完成。在授予Lilly公司人胰岛素特许权之后，基因工程技术公司于1985年成为首家推出生物医药产品的生物技术公司，它的成果是人体生长素。Boyer自公司成立起一直担任副总裁直至1990年。那时，他将副总裁的位置让出，换取了董事会的一席之地。基因工程公司作为美国最早和最大的生物技术类风险投资支持的企业，代表着美国生物医学产业未来的发展的方向，同时也为世界风险投资事业的发展提供了新的思路。

结核菌素试验

结核菌素试验是应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否能引起超敏反应的一种试验。

1.结核菌素试剂　以往用旧结核菌素（old tuberculin，OT）。系将结核分枝杆菌接种于甘油肉汤培养基，培养4～8周后加热浓缩过滤制成。稀释2 000倍，每0.1ml含5单位。目前都用纯蛋白衍化物（purified protein derivative，PPD）。PPD有二种：人结核分枝杆菌制成的PPD-C和卡介苗制成的BCG-PPD。每0.1ml含5单位。

2.试验方法与意义　常规试验分别取2种PPD 5个单位注射两前臂皮内，48～72h后红肿硬结超过5mm者为阳性，≥15mm为强阳性，对临床诊断有意义。若PPD-C侧红肿大于BCG-PPD侧为感染。反之，BCG-PPD侧大于PPD-C侧，可能系卡介苗接种所致。

阴性反应表明未感染过结核分枝杆菌，但应考虑以下情况：①感染初期，因结核分枝杆菌感染后需4周以上才能出现超敏反应；②老年人；③严重结核患者或正患有其他传染病，如麻疹导致的细胞免疫低下；④获得性细胞免疫低下，如艾滋病或肿瘤等用过免疫抑制剂者。为排除假阴性，国内有的单位加用无菌植物血凝素（PHA）针剂 ，0.1ml含10μg作皮试。若24h红肿大于PHA皮丘者为细胞免疫正常，若无反应或反应不超过PHA皮丘者为免疫低下。

结核菌γ干扰素释放试验

细胞免疫介导的结核菌γ干扰素释放试验（T-cell interferon gamma release assays，TIGRA，又称IFNGRA或GRA）是近年来采用酶联免疫吸附测定（ELISA）或酶联免疫斑点（ELISPOT）法定量检出受检者全血或外周血单个核细胞对结核分枝杆菌特异性抗原的IFN-γ检测释放反应，用于结核菌潜伏感染的诊断。IFN-γ为Thl细胞分泌的一种细胞因子，不但能够反映机体结核的Thl细胞免疫情况，还与体内结核菌的抗原含量密切相关。被结核分枝杆菌抗原致敏的T细胞再遇到同类抗原时能产生高水平的IFN-γ，因此被用于结核潜伏感染的诊断。

目前美国FDA已批准的基于ELISA的QuantiFERON-TB（GIT-G）和欧洲使用的基于ELISPOT的T-Spot.TB，都是以早期分泌性抗原靶-6（ESAT-6）和培养滤液蛋白-10（CFP-10）为抗原的。其中，QFT-G又出现了一种用试管的改良方法，称为QFT-GIT（QFT-inTube）。ESAT-6和CFP-10都是从短期培养的滤液中分离的低分子量蛋白质，具有良好的免疫原性，而且它们是选自结核分枝杆菌基因组差异区1（region of difference，RD1）基因编码的结核杆菌特异性蛋白。某些TIGRA试验除了上述2种抗原外，还常用TB7.7抗原。TB7.7是结核分枝杆菌基因组差异区13（RDl3）基因编码的结核杆菌特异性抗原。这3种抗原在BCG和绝大部分环境分枝杆菌中都缺失（除外堪萨斯分枝杆菌、海水分枝杆菌和苏加分枝杆菌），因此避免了与卡介苗和大多数非结核分枝杆菌抗原的交叉反应。

TIGRA的敏感性和特异性都强于TsT，特别是在HIV感染者、自身免疫性疾病、老人和幼儿等免疫力低下人群的检测中。全球有约1300万人共同感染了HIV和结核杆菌。感染HIV的LTBI由于免疫缺陷，更容易从潜伏感染发展为活动性肺结核。Jiang等对BCG计划接种区域的100个HIV共感染患者用T-Spot.TB检测，结果显示T-Spot.TB对于有过BCG接种历史的HIV共感染的LTBI检测比TsT更敏感快速，而且特异性高。Balcells等发现，QFT-G比TST在诊断HIV的LTBI时更少受免疫抑制的影响。Stephan等发现，QFT-G和T-Spot.TB在检测HIV患者的LTBI时比TST更敏感。QFT-G和T-Spot.TB的协同性很差，对于不同CD4细胞数量的患者有不同的结果。Aichelburg等发现，QFTGIT可以用于HIV-1感染者的活动性肺结核检测。

肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种促炎细胞因子，在多种自身免疫性疾病中起重要的病理作用。但是，抗TNF-α的治疗会导致潜伏性肺结核转变为活动性肺结核，而自身免疫性疾病患者由于免疫抑制。TST容易产生假阴性。研究显示，QFT-G和T-Spot.TB在免疫介导炎症疾病（IMID）患者中检测LTBI的敏感性和特异性都比TST高。终末期肾病（ESRD）患者感染结核分枝杆菌的几率比健康人高10～25.3倍。Lee等比较了QFT-G、T-Spot.TB和TsT在ESRD患者中LTBI的诊断，结果显示QFT-G和T-Spot.TB的结果较类似，但TsT和QFT-G、T-Spot.TB的实验结果相差较远。T-Spot.TB的检出率比QFT-G高（分别为46.9%和40.0%）。然而，也有研究显示QFT-G由于有许多不确定性结果，因此不能用于类风湿性关节炎LTBI的检测。

Bergamini等应用QFT-G、QFT-GIT和T-Spot.TB技术对496个0-19岁的儿童和青少年LTBI进行检测，结果发现2种QFT检测得出的结果更相似，QFT相对于T-Spot.TB在4岁以下儿童中得到的非确定性结果更多。Chun等研究显示，QFT-GIT比TsT在诊断接种过BCG的儿童中LTBI的特异性更强。

上述研究表明，TIGRA在HIV共感染、自身免疫性疾病和免疫力低下的儿童中，对LTBI的检出率更高。但是，TIGRA存在无法区分活动期和潜伏期结核、需要抽血获取淋巴细胞、要求专业的操作人员和具备相应条件的实验室、样品必须在采集后8h内完成等缺点，现阶段仍未能完全取代TsT。另外，现阶段研究的样本都非常小，也没有诊断LTBI的金标准。因此，对于TIGRA还有待进一步研究。

微生物学检查法

结核病的症状和体征往往不典型，虽可借助X线摄片诊断，但确诊仍有赖于细菌学检查。

标本

标本的选择根据感染部位。可取痰、支气管灌洗液、尿、粪、脑脊液或胸、腹水。其他肺外感染可取血或相应部位分泌液或组织细胞。

直接涂片镜检

标本直接涂片或集菌后涂片，用抗酸染色。若找到抗酸阳性菌即可初步诊断。抗酸染色一般用Ziehl-Neelsen法。为加强染色，可用IK（intensified Kinyoun）法染色。将石炭酸复红染色过夜，用0.5% 盐酸乙醇脱色30s，则包括大多结核分枝杆菌L型也可着色。为提高镜检敏感性，也可用金胺染色，在荧光显微镜下结核分枝杆菌呈显金黄色荧光。

浓缩集菌

先集菌后检查，可提高检出率。培养与动物试验也必须经集菌过程以除去杂菌。脑脊液和胸、腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% NaOH（痰和碱的比例为1:4，尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1）处理15min，时间过长易使结核分枝杆菌L型与非结核分枝杆菌死亡。尿标本先加5% 鞣酸、5% 乙酸各0.5ml于锥形量筒内静置，取沉淀物处理。处理后的材料再离心沉淀。取沉淀物作涂片染色镜检。若需进一步作培养或动物接种，应先用酸中和后再离心沉淀。

分离培养

将经中和集菌材料接种于固体培养基，器皿口加橡皮塞于37℃培养，每周观察1次。结核分枝杆菌生长缓慢，一般需2～4周长成肉眼可见的落菌。液体培养可将集菌材料滴加于含血清的培养液，则可于1～2周在管底见有颗粒生长。取沉淀物作涂片，能快速获得结果，并可进一步作生化、药敏等测定和区分结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌。国内学者已证明结核分枝杆菌L型可存在于血细胞内或粘附于细胞表面。这种患者往往血沉加快，用低渗盐水溶血后立即接种高渗结核分枝杆菌L型培养基能提高培养阳性率。

动物试验

将集菌后的材料注射于豚鼠腹股沟皮下，3～4周后若局部淋巴结肿大，结核菌素试验阳转，即可进行解剖。观察肺、肝、淋巴结等器官有无结核病变，并作形态、培养等检查。若6～8周仍不见发病，也应进行解剖检查。

快速诊断

一般涂片检查菌数需5x103～4/ml，培养需1x102/ml，标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果，且培养需时较长。目前已将多聚酶链反应（PCR）扩增技术应用于结核分枝杆菌DNA鉴定，每ml中只需含几个细菌即可获得阳性，且1-2d得出结果。操作中需注意实验器材的污染问题，以免出现假阳性。又细菌L型由于缺壁并有代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使细胞膜破裂释出DNA，以致造成PCR假阴性。用组织磨碎器充分研磨使细胞破裂后，则可出现阳性。目前有条件的单位使用BACTEC法，以含14C棕榈酸作碳源底物的7H12培养基，测量在细菌代谢过程中所产生的14C量推算出标本中是否有抗酸杆菌，5～7d就可出报告。

近年来国内外研究证明临床各种类型的肺结核患者中40% 左右分离出L型。经治疗的结核病人细菌型消失，L型常持续存在。有空洞患者痰中已不排细菌型者，8% 左右仍可检出L型。故有学者建议将多次检出L型亦作为结核病活动判断标准之一，细菌型与L型 均转阴才能作为痰阴性。