róng xuè fǎn yìng
免疫溶血反应是补体参与的抗体致敏红细胞的溶解反应。参与反应的成分有3种：①红细胞，一般用绵羊红细胞（SRBC）；②抗红细胞抗体，也称溶血素，多为家兔抗SRBC的抗血清；③补体。
溶血反应的直接用途是测定总补体活性或溶血素的效价；也可利用溶血系统作为指示剂，检测另一反应系统的抗原或抗体，即补体结合试验。
2 溶血反应的检测试剂2.1 （一）补体检测血清补体水平或补体活性时需要从受检者采血及分离血清。做补体结合试验时多采用豚鼠血清作为实验用补体的来源。因为补体在体外极易衰变，所以检测补体活性的血清标本和作为补体试剂的血清必须新鲜。
受检者一般做静脉采血，在动物可做心脏采血。血清分离后应及时使用，最好在当日用完。必须保存时采用小量分装的办法，置－70℃下可保存数月，避免反复冻融。冻干制品可长期保存，但其活性都不同程度地比新鲜血清降低。
以豚鼠血清作补体来源时，应考虑到个体差异。为了确保血清中补体的有效活性，必须取3只以上豚鼠的血清混合后使用。
2.2 （二）绵羊红细胞从绵羊颈静脉无菌采血，抽出血液后立即小心地注入放有玻璃珠的无菌干燥三角烧瓶中，充分旋摇15～20min，以除去纤维蛋白。也可将羊血与等量或2倍量的Alsever血液保存液混合，既有抗凝作用，又适于储存；分装后置4℃，可使用3周。
实验前，取适量抗凝血，加入8～10倍的生理盐水，轻轻混匀后2000r/min离心5min；弃上清，沉淀的红细胞用生理盐水再洗一次，这时上清为无色澄清，如显红色说明有溶血现象，应更换新鲜羊血；第三次用缓冲液洗涤，弃上清，取压积红细胞用缓冲液配制SRBC悬液，使用浓度一般为2％～5％。为使红细胞浓度标准化，可吸取少量红细胞悬液，中入20～30倍的稀释液中，在542nm波长比浊，以吸光度为标准调整红细胞浓度。
2.3 （三）溶血素溶血素即抗绵羊红细胞抗体，多是以绵羊红细胞免疫家兔而得到兔抗血清。一般没有必要进一步提纯抗体，但在试验前需先进行加热56℃30min或60℃3min以灭活补体。
由于补体溶血试验及补体结合试验均是比较精密的试验，其结果与溶血素的效价有关，所以试验需要滴定溶血素效价；在制备抗血清的过程中，于动物采血前和分离抗血清后也需要滴定溶血素效价。
1．溶血素稀释稀释溶血素时，要先对效价有个大概的估计，以便确定稀释度的范围。动物采血前滴定时稀释范围要稍大些，实验前的滴定便以原先的记录作为参考（溶血素的效价多在数千单位以上）。溶血素稀释一般不采用连续倍比稀释法，因为稀释到最后时跨度太大，不容易确定单位。为了便于操作，现举例按表141配制不同稀释度的溶血素。
表141不同浓度溶血素的配制
最终稀释度 缓冲液（ml） 所加溶血素 稀释度 体积（ml） 1:1000 1.8 1:100 0.2 1:2000 0.2 1:1000 0.2 1:3000 0.4 1:1000 0.2 1:4000 0.2 1:2000 0.2 1:5000 0.8 1:1000 0.2 1:6000 0.2 1:3000 0.2 1:8000 0.2 1:4000 0.2 1:10000 0.2 1:5000 0.22．效价滴定将稀释好的溶血素及其他试剂按表142所示逐步加入到各试管中，放置37℃水浴，不要盖上水浴箱的盖子，以免盖子上冷凝的水蒸气滴入试管内引起非补体性溶血。30min后取出观察结果。
表142溶血素的滴定
管号 溶血素稀释度 试管内加的各种试剂材料 结果 溶血素（ml） 1:60稀释补体（ml） 缓冲液（ml） 20％羊红细胞（ml） 1 1:1000 0.1 0.2 0.2 0.1 全溶 2 1:2000 0.1 0.2 0.2 0.1 全溶 3 1:3000 0.1 0.2 0.2 0.1 全溶 4 1:4000 0.1 0.2 0.2 0.1 全溶 5 1:5000 0.1 0.2 0.2 0.1 大部分 6 1:6000 0.1 0.2 0.2 0.1 微溶 7 1:8000 0.1 0.2 0.2 0.1 不溶 8 1:10000 0.1 0.2 0.2 0.1 不溶 9 （对照） － － 0.5 0.1 不溶温育反应后，完全溶血的试管内液体红色透明，放置一段时间后管底无细胞沉淀，离心后可见少许细胞碎渣。不溶血的管内液体浑浊；放置后可见红细胞沉淀，上清无色透明。不同程度的不完全溶血介于两者的中间变化态。
按照以上标准，以产生完全溶血的最高稀释管为最大有效反应管，以该管的溶血素稀释倍数为溶血素产效价。例如表142中的溶血素效价应为1:4000；在1:4000稀释的情况下，反应液中所含溶血素的的量为1U/ml。
做补体活性测定或补体结合试验时，一般使用2U/ml溶血素（在本例做1:2000稀释），与SRBC悬液等体积混合。
2.4 （四）稀释缓冲液磷酸缓冲液或巴比妥缓冲液等均可用于溶血试验，pH值应调至7.2～7.4之间。另加入适量氯化钠以保持等渗，并适当地加入一些钙离子和镁离子，这是补体活化所不可缺少的。有的配方还加入0.1％的明胶以使蛋白溶液稳定；加入0.01％NaN3可以防腐，利于较长时间保存。
3 溶血反应测定补体法3.1 （一）CH50试验原理补体最主要的活性是溶细胞作用，这种活性很容易通过溶血反应进行检测。在一个适当的、稳定的反应系统中，溶血反应对补体的剂量依赖呈一个特殊的S形曲线（图141）。
图141溶血程度与补体含量的关系
从图141可以看出，在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化不能使溶血程度有显著改变，速溶血对补体量的变化不敏感。但在半溶血（50％溶血）上下时曲线最陡，即使补体含量仅有较小变动时，溶血程度也会发生较大的改变，也就是说对补体量的变化非常敏感。故采用50％溶血作为终点指标要比100％溶血敏感得多，这一方法称为补体50％溶血（plementhemolysis50％），简称为CH50。
3.2 （二）CH50试验方法取新鲜血清标本进行试验。按表143的要求在各管中加入试剂和反应物，一起放37℃水浴箱中温育30min。
做CH50试验时，应同时配制50％溶血的标准管。取2％SRBC悬液0.5ml，加2.0蒸馏水，使SRBC全部溶解；再加入2.0ml1.8％NaC1溶液校正为等渗溶液；最后加入2％SRBC悬液0.5ml，即成为50％溶血状态；混匀后取该悬液2.5ml，随试管一起进行温育，便是50％溶血标准管。
表143总补体溶血活性测定
试管号码 1:20稀释血清（ml） 巴比妥缓冲液（ml） 2U溶血素（ml） 2％羊红细胞（ml） 1 0.10 1.40 0.5 0.5 2 0.15 1.35 0.5 0.5 3 0.20 1.30 0.5 0.5 4 0.25 1.25 0.5 0.5 5 0.30 1.20 0.5 0.5 6 0.35 1.15 0.5 0.5 7 0.40 1.10 0.5 0.5 8 0.45 1.05 0.5 0.5 9 0.50 1.00 0.5 0.5 10 0.00 1.50 0.5 0.5温育后将所有试管2500r/min离心5min，通过观察比较，选择溶血程度与标准管相近的两管在分光光度计上分别读取吸光度，以最接近标准管的那一管定为最高有效反应管，取其稀释倍数代入下列公式，求得CH50的测定值（单位U）。
每毫升血清总补体活性（单位）＝×稀释倍数
用CH50法测定总补体溶血活性时，所测得的值与反应体积成反比例关系，上例采用的液体总量为2.5ml，测得的总补体活性的参考范围为50～100U/ml。
3.3 （三）临床意义CH50法主要检测的是补体经典途径的溶血活性，所反映的主要是补体9种成分的综合水平。如果测定值过低或者完全无活性，首先考虑补体缺陷，可分别检测C4、C2、C3和C5等成分的血清含量；严重肝病时血浆蛋白合成能力受损，营养不良时蛋白合成原料不足，这些也都可以不同程度地引起血清补体水平下降。
在患系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎等自身免疫病时，血清补体水平随病情发生变化。疾病活动期补体活化过度，血清补体水平下降；病情稳定后补体水平又反应性增高。另外，补体各成分在不同的自身免疫病时可有特征性的表现（详见第二十五章），因此补体检测常可作为自身免疫病诊断或是否有疾病活动的参考指标。
抗o是溶血性链球菌产生的一种代谢产物。
溶血性链球菌产生的一种代谢产物能溶解红细胞，所以这种产物被取名为“O”溶血素，人体感染了A组溶血性链球菌后，“O”溶血素在体内作为一种抗原物质存在。为了测定这种能中和链球菌溶血素“O”的抗体含量，就称为抗链球菌溶血素“O”试验。
成人含量在0——200IU/ml，儿童<250U。正常值因年龄、季节、气候、链球菌流行情况，尤其地区而有所差别。类风湿时部分病人ASO升高在400单位以上。
扩展资料：
抗o的意义：
1、溶血性链球菌感染、猩红热、丹毒、链球性咽炎、扁桃体炎。对风湿热、急性肾小球肾炎有间接诊断价值、若多次检测结果递增，并伴红细胞沉降率加快可有助于诊断。少数非溶血性链球菌感染：病毒性肝炎、肾病综合症、结核病、结缔组织病、亚急性感染性心内膜炎、多发性骨髓瘤等。
2、ASO增高见于上呼吸道感染、皮肤及软组织化脓性感染、A群溶血性链球菌所致的败血症。
参考资料来源：百度百科-抗o
第二节 链球菌链球菌(Streptococcus)是化脓性球菌的另一类常见的细菌，广泛存在于自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部，引起各种化脓性炎症，猩红热，丹毒，新生儿败血症，脑膜炎，产褥热以及链球菌变态反应性疾病等。
一、生物学性状
（一）形态染色
球形或卵圆形，直径0.6～1.0um，呈链状排列，短者4～8个细菌组成，长者有20～30个细菌组成。幼令培养物大多可见到透明质酸形成的荚膜。无芽胞，无鞭毛，革兰氏染色阳性。
（二）培养特性
需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。营养要求较高。普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。最适温度37℃，最适PH7.4～7.6，血琼脂平板上形成灰白、光滑、园形突起小菌落，不同菌株有不同溶血现象。
（三）生化反应
能发醇简单的糖类，产酸不产气。一般不分解菊糖，不被胆汗或1%去氧胆酸钠所溶解。这两种特性用来鉴定甲型溶血型链球菌和肺炎球菌。
（四）抗原结构
主要有三种：
1．核蛋白抗原或称P抗原，无特异性，各种链球菌均同，与葡萄球菌有交叉。
2．多糖抗原或称C抗原系统族特异性抗原，是细菌壁的组成成份。对人致病的90%属于A族，其次为B族，其它族少见。
3．蛋白质抗原或称表面抗M、R、T、S等四种不同性制质的抗原组份，具有型特异性。是链球菌细胞壁的蛋白质抗原，位于C抗原外层，同族链球菌可根据表面抗原不同进行分型，如A族链状菌可据此分为60多型。
（五）分类
1．根据对红细胞的溶血能力
（1）甲型溶血性链球菌（α-Hemolytic streptococcus）,菌落周围有1～2mm宽的草绿溶血环，称甲型溶血或α溶血。这类链球菌亦称草绿色链球菌（Streptococcus viridans）。此类链球菌为条件致病菌。
（2）乙型溶血性链球菌（β-Hemolytic streptococcus）菌落周围形成一个2～4mm宽，界限分明、完全透明的溶血环，完全溶血，称乙型溶血或β溶血。这类细菌又称溶血性链球菌(Streptoccus hemolyticus)，致病力强，引起多种疾病。
（3）丙型链球菌（γ-Streptococcus），不产生溶血素，菌落周围无溶血环，故又称不溶血性链球菌(Streptococcus non-hemolytics)，一般不致病。
2．根据抗原结构分类
按C抗原不同可分类A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T等18个族。对人致病的大多属于A族。A族又称为化脓性链球菌（Pyogenic streptococcus）。
3．根据对氧需求分类 又可分为需氧、兼性厌氧和厌氧三大类链球菌。
（六）抵抗力
抵抗力，55℃可杀死大部分链球菌，对一般消毒剂敏感，在干燥尘埃中可存活数日，对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素等均敏感，耐药性低。
二、致疾性与免疫性
（一）致病物质
A族链球菌有较强的侵袭力，可产生多种酶和外毒素。
1．M蛋白 是链球菌细胞壁中的蛋白质组份，具有抗吞噬和抗吞噬细胞内的杀菌作用。纯化的M蛋白能使纤维蛋白原沉淀，凝集血小板，白细胞，溶解多形核细胞，并抑制毛细血管中的细胞的移动。M蛋白有抗原性，刺激机体产生型特异性抗体，并与变态反应疾病有关。
2．脂磷壁酸（LTA） 与细菌粘附于宿主细胞表面有关，大多数LAT位于细胞膜和肽聚糖之间，通过肽聚糖孔伸展至细菌细胞表面，人类口腔粘膜和皮肤上皮细胞、血细胞等细胞膜上均有LAT的结合位点。
3．透明质酸酶（Hyaluronidaes），能分解细胞间质的透明质酸，使病菌易于在组织中扩散。又称为扩散因子。
4．链激酶(Streptokinase , SK),又称链球菌溶纤维蛋白酶(Streptococcal fibrinolysin)是一种激酶，能激活血液中的血浆蛋白酶原，成为血浆蛋白酶，即可溶解血块或阻止血浆凝固，有利于细菌在组织中的扩散。耐热，100℃50分钟加热仍保持活性。链激酶抗体能中和该酶的活性。
5．链道酶（Streptodonase）又名脱氧核糖核酸酶(Streptococcal deoxyribonuclease)。主要由A、C、G族链球菌产生。此酶能分解粘稠脓液中具有高度粘性的DNA，使脓汁稀薄易于扩散。产生的相应抗体有中和该酶的活性。用链激酶、链道酶制剂进行皮肤试验作为测定机体细胞免疫的一种方法。
6．链球菌溶血素（Streptolysin） 有溶解红细胞，杀死白细胞及毒害心脏的作用，主要有“O”和“S”两种。
链球菌溶血素O（Streptolysin OSLO） 为含-SH基的蛋白质，对氧敏感，遇氧时一SH基即被氧化为-SS-基，暂时失去溶血能力。若加入0.5%亚硫酶钠和半胱氨酸等还原剂，又可恢复溶血能力。溶血素O能破坏白细胞和血小板。动物试验又证实对心脏有急性毒害作用，使心脏骤停。抗原性强，感染后2～3周，85%以上病上产生抗“O”抗体，病愈后可持续数月甚至数年，可作为新近链球菌感染，或可能风湿活动的辅助诊断。
溶血素“S”（Streptolysin S,SLS） 是一种小分子的糖肽，无抗原性。对氧稳定，对热和酸敏感。血平板所见透明溶血是由“S”所引起，能破坏白细胞和血小板，给动物静注可迅速致死。注射小鼠腹腔，引起肾小管坏死。
7．致热外毒素（Pyrogenic extoxin）曾称红疹毒素(Erythrotoxin)或猩红热毒素(Scarletfever toxin)是人类猩红热的主要致病物质，为外毒素，使病人产生红疹。该毒素是蛋白质，对热稳定，具有抗原性，则产生的毒素能中和该毒素的活性。但可分为A、B、C三种不同抗原性的毒素。无交叉保护作用。该毒素还有内毒素样的致热作用，对细胞或组织有损害作用。
（二）所致疾病
链球菌引起人类多种疾患，A族占90%以上，在致分为化脓性、中毒性和变态反应三类。
1．化脓性炎症 由皮肤伤口侵入，引起皮肤及皮下组织化脓性炎症，如疖痈，蜂窝组织炎、丹毒等。沿淋巴管扩张，引起淋巴管炎，淋巴腺炎，败血症等，经呼吸道侵入，常有急性扁桃腺炎、咽峡炎，并蔓延周围引起脓肿、中耳炎、乳突炎、气管炎、肺炎等。不卫生接生，经产道感染，造成“产褥热”。
2．猩红热 由产生致热外毒素的A族链球菌所致的急性呼吸道传染病，临床特征为发热、咽峡炎、全身弥漫性皮疹和疹退后的明显脱屑。
3．链球菌感染后疾病 主要是病原菌引起的变态反应疾病
风湿热 由A族链球菌的多种型别引起，临床表现以关节炎、以肌炎为主。致病机理认为两种：一是第Ⅱ型变态反应，链球菌细壁多糖抗原和心肌瓣膜，关节组织糖蛋白有共同抗原性，胞壁蛋白抗原和心肌有共同抗原性。二是第Ⅲ型变态反应，可能是M蛋白的免疫复合物沉积于心瓣膜和关节滑液膜上造成。
急性肾小球肾炎 多见于儿童和少年，大多数由A族12型链球菌引起。临床表现为蛋白尿、浮肿和高血压。也是一种变态反应性疾病。链球菌的某些抗原与肾小球基底膜有共同抗原，机体针对链球菌所产生的抗体与肾小球基底膜发生反应，属第Ⅱ型变态反应。由链球菌的M蛋白所产生的相应抗体形成的免疫复物沉积于肾小球基底膜，造成基底膜损伤，属于第Ⅲ型变态反应。
4．其他疾病
B族链球菌又称无乳链球菌（Streptococus agalactiae）当机体免疫功能低下时，可引起皮肤感染、心内膜炎、产后感染、新生儿败血症和新生儿脑膜炎。
甲型（草绿色）链球菌 人类口腔和上呼吸道的正常菌群，若心脏瓣膜已有缺陷或损伤，本菌可在损伤部位繁殖，引起亚急性细菌性心内膜炎。在拔牙或摘除扁桃体时，寄居在口腔、龈缝中的草绿色链球菌可侵入血流引起菌血症。
变异链球菌 为厌氧菌，可引起龋齿。
（三）免疫性
A族链球菌感染后，可产生特异免疫，主要是M蛋白的抗体（lgG）。由于型别多，无交叉免疫性。猩红热病后可产生对同型红疹毒素的抗体，建立同型抗毒素免疫。检测易感人群对猩红热有无感受性的试验称为狄克氏试验(Dick test)，即用一定量红疹毒素作皮肤试验。
三、微生物学检查法
根据链球菌所致疾病不同，可采取脓汁、咽拭、血液等标本送检。
（一）直接涂片镜检
取脓汁涂片，革兰氏染色，镜检，发现革兰氏阳性呈链状排列的球菌，就可以初步诊断。
（二）分离培养
脓汁或棉拭直接划线接种在血琼脂平板上，孵育后观察有无链球菌菌落。根据溶血性不同，可区分为甲型、乙型或丙型链球菌。有β溶血的菌落，应与葡萄球菌区别；α溶血的菌落，要和肺炎球菌鉴别。疑有败血症的血标本，应先在葡萄糖肉汤中增菌后再在血平板上分离鉴定。心内膜炎病例，培养草绿色链球菌宜孵育3个星期以上。
（三）血清学试验
抗链球菌溶血素O试验（Anti-streptolysin O test,ASO test）简称抗O试验。常用于风湿热的辅助诊断。患者血清中的抗O大多在250单位左右，活动者一般超过400单位。
Dick试验 猩红热病人早期阳性，病后转阴。
四、防治原则
链球菌感染的防治原则与葡萄球菌相同。链球菌主要通过飞沫传染，应对病人和带菌者及时治疗，以减少传染源。空气、器械、敷料等注意消毒。对急性咽峡炎和扁桃体炎患者，尤其是儿童，须治疗彻底，防止变态反应疾病的发生。所有溶血性A链球菌对磺胺、青霉素及红霉素等都敏感。其他族细菌对抗生素的敏感不同，临床应用最好作药物敏感试验。
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