革兰氏染色法的原理是通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙。
因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差。
在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
扩展资料：
一、方法概述
细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G－）。
为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。
二、常见种类
常见的革兰氏阳性菌有：葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌(Streptococcus)、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等。
常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等。
参考资料来源：百度百科－革兰氏染色法
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌不脱色，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫作革兰氏阳性菌（G＋），后者为革兰氏阴性菌（G-）。为方便观察，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。芽孢杆菌和绝大多数球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏阳性反应；弧菌、螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都呈革兰氏阴性反应。
两者的区别：①细胞壁组成成分不同。革兰氏阳性菌细胞壁含大量的肽聚糖，含磷壁酸，不含脂多糖；革兰氏阴性菌含极少肽聚糖，含脂多糖，不含磷壁酸。两者的不同还表现在各种成分的含量不同，尤其是脂肪含量明显不同，革兰氏阳性菌脂肪含量为1%～4%，革兰氏阴性菌脂肪含量为11%～22%。
②细胞壁结构不同。革兰氏阳性菌细胞壁较厚，为20～80纳米，结构较简单。革兰氏阴性菌细胞壁较薄，为10纳米，其结构较复杂，分为外壁层和内壁层；外壁层又分3层，最外层是脂多糖，中间是磷脂层，内层为脂蛋白，内壁层含肽聚糖，不含磷壁酸。
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