dna测量方法

DNA检测

技术有很多，主要分为定性和定量方法。给你举几个：1，分子杂交技术，（包括southern杂交，northern杂交，基因芯片等）分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备，例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛（Dig）等。由于地高辛标记核酸探针，操作方便、灵敏度高，已标记的探针在4℃贮存可达两年之久，方便随时应用，所以现在常采用地高辛标记核酸探针，用光标记法将光敏Dig标记到探针上，制成光敏-Dig-核酸探针，再与固定在硝酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交，使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合，最后可用不同的检测方式进行检测，

发光检测

和显色检测均可，灵敏度可达10pg以下2，基于DNA结合蛋白的方法Threshold®

Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白，单链DNA（ssDNA）结合蛋白（SSB）和抗ssDNA

的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA

的单抗与变性的宿主细胞DNA结合最终形成复合物，通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝酸纤维素膜，在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉，最后放于有

尿素溶液

的读数仪，尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2

导致PH值发生变化，读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量，从而达到检测残余DNA含量的目的。3，PCR法，其中以实时定量PCR法最为突出荧光定量

PCR是基于PCR扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，产物的增加可以通过荧光信号指示，通过实时监控PCR体系中的荧光信号，对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量，通过加入已知浓度的

标准样品

绘制标准曲线，然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度，从而达到检测残余DNA含量的目的。此外，对DNA的定量技术也有很多，可以看下这篇文章《核酸定量技术及其在生物检测中的应用》

实验方法原理 幼嫩组织的细胞处于旺盛的分裂阶段，细胞核较大而细胞质较少，核酸浓度高，且内含物少，次生代谢产物少，蛋白质及多糖类物质相对较少，在SDS或CTAB物质存在时，经机械研磨，使细胞破裂释放出内含物，提取的DNA、RNA的产量高，纯度好。提取DNA所用的提取液、吸头、离心管等需要高压灭菌以灭活Dnase。DNA定量分析可采用紫外光谱分析法。原理是DNA分子在260nm处有特异的紫外吸收峰，且吸收强度与DNA的浓度成正比。此外，还可以通过琼脂糖凝胶电泳上显示的DNA带的亮度来分析，因为EB作为一种荧光染料，能插入DNA的碱基对平面之间而结合于其上，在紫外光的激发下产生荧光，DNA分子上EB的量与DNA分子的长度和数量成正比。

实验内容和实验步骤

1．提取DNA

（1）提取DNA所用的提取液、吸头、离心管等需要在高压灭菌锅中121℃（约1.1 kg/cm2）高压灭菌20 min。

（2）用液氮将50mg 幼嫩叶片研磨成细粉，置于1.5ml 离心管中加入预热至65℃的600μl 的CTAB提取液，轻摇混匀。

（3）65℃水浴1小时，其间轻摇混匀。

（4）12000rpm离心10min，取上清转移至另一1.5ml 离心管中。

（5）向上清液中加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），轻轻混匀10min，然后12000rpm离心10min，再转移上清入新管。

（6）向上清液加入等体积的氯仿/异戊醇（24：1），轻轻混匀10min，然后12000rpm离心10min，再转移上清入新管。

（7）向上清液中加1/10体积的3M NaAC (pH5.2)，等体积的冷异丙醇，小心混匀。12000rpm离心10min，弃上清。

（8）用70%乙醇洗涤沉淀一次，12000rpm离心，弃上清。

（10）将沉淀在超净工作台上吹干，加50μl TE (pH8.0)室温溶解。

电泳检测或用紫外分光光度计检测DNA的浓度和质量。

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