最后弱弱地问一句,题主想干啥坏事捏?
DNA变性的温度基本都会设置在90C以上,这样可以满足双链变性成单链。但是一旦温度降低,溶液中的两条互补的单链又会重新退火到一起,形成双链,任然具有生物学活性,并没有丧失活性。有人为了获得单链形式存在的DNA,会先进行5-10min的煮沸,然后急冷,让变成单链的DNA不再退火成双连。不像蛋白,经过高温加热后,蛋白质变性,绝大部分就很难恢复了。
当然,如果将DNA在高温条件下长时间保存的话,会造成DNA的降解。所以不知道你是想让DNA变性,还是想让DNA失活?为什么?如果是为了要降解样品中的DNA的话,建议使用DNase。
DNA甲基化在调节植物基因表达上有着重要的作用。植物DNA甲基化程度比较高,核基因组中几乎20%30%的胞嘧啶残基处于甲基化状态。然而研究表明,在转基因植物中DNA甲基化却严重影响了外源基因的正常表达。
DNA甲基化易发生在外源基因启动子区CG和CXG位点的胞嘧啶残基上,该区碱基的甲基化往往导致转录受到抑制。目前发现造成外源基因失活的DNA甲基化主要发生在基因5′端的启动子区域,但也发现外源基因甲基化可延伸至基因的3′端,总之甲基化过程是从启动子区域开始的。
植物DNA甲基化引起外源基因失活的现象十分类似细菌的限制修饰系统,这一防御机制可以有效地识别外来DNA序列。植物染色体上的碱基组成是不均一的,某些区段常有确定的GC含量比例,外源DNA的插入会破坏原有的组织结构,因此可被植物修饰系统所识别,并通过甲基化使之失活。DNA甲基化引起外源基因失活是不稳定的,去甲基化试剂可恢复外源基因的表达活性,有性杂交、体外培养、嫁接、生存环境的改变都可使外源基因甲基化发生变化。
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