SNP基因分型的常见方法有如下几种:
TaqMan探针法 针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时,该探针与模板退火,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
3.HRM法 高分辨率熔解曲线分析(HRM)是近几年兴起的SNP研究工具,它通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况,来判断是否存在SNP,而且不同SNP位点、是否是杂合子等都会影响熔解曲线的峰形,因此HRM分析能够有效区分不同SNP位点与不同基因型。这种检测方法不受突变碱基位点与类型的局限,无需序列特异性探针,在PCR结束后直接运行高分辨率熔解,即可完成对样品基因型的分析。该方法无需设计探针,操作简便、快速,成本低,结果准确,并且实现了真正的闭管操作。
4.Mass Array法 MassARRAY分子量阵列技术是Sequenom公司推出的世界上领先的基因分析工具,通过引物延伸或切割反应与灵敏、可靠的MALDI-TOF-MS技术相结合,实现基因分型检测。基于MassARRAY平台的iPLEX GOLD技术可以设计最高达40重的PCR反应和基因型检测,实验设计灵活,分型结果准确性高。根据应用需要,对数十到数百个SNP位点进行数百至数千份样本检测时,MassARRAY具有最佳的性价比,特别适合于对全基因组研究发现的结果进行验证,或者是有限数量的研究位点已经确定的情况。
5.Illumina BeadXpress法 采用Illumina公司的BeadXpress系统进行批量SNP位点检测,可以同时检测1-384个SNP位点,往往用于基因组芯片结果确认,适合高通量检测。微珠芯片具有高密度、高重复性、高灵敏度、低上样量、定制灵活等特点,极高的集成密度,从而获得极高的检测筛选速度,在高通量筛选时可显著降低成本。
基因分型是通过使用生物学试验检查个体的DNA序列的过程,也是将目标序列与另一个体的序列或参考序列进行比较来确定个体的遗传构成(基因型)差异的过程。基因分型揭示了个体从父母那里继承的等位基因。传统的基因分型是使用DNA序列通过使用分子工具来定义生物群体。
中文名
基因分型
类型
技术
利用
生物学检测方法测定个体基因型
外文名
Genotyping
又称
基因型分析
目
录
1简介 2分型技术 3临床应用 4面临问题
1简介
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使用技术包括聚合酶链反应(PCR)、DNA片段分析、寡核苷酸探针(ASO probes)、基因测序、核酸杂交、基因芯片技术等。
2分型技术
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一些常用的基因分型技术有:限制性片段长度多态性(RestrictionFragment Length Polymorphism, RFLP)、末端限制性长度多态性(Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism, t-RFLP)、扩增片段长度多态性(Amplifiedfragment length polymorphisms, AFLP)、多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)等。
3临床应用
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DNA片段分析能够诊断疾病导致的遗传变异,如微卫星序列不稳定(Microsatellite Instability, MSI)、三体型(Trisomy)、非整倍体(Aneuploidy)、杂合性缺失(loss of heterozygosity, LOH)等。微卫星序列不稳定和杂合性缺失与结肠癌、乳腺癌、子宫颈癌的肿瘤细胞基因型有关。第21号染色体的三体型是种常见的非整倍体,临床表现为先天愚型(Down Syndrome)。
4面临问题
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由于技术的限制,成熟的基因分型还局限于基因组中的一部分。
基于分子杂交→基于DNA扩增→基于DNA测序
将DNA转移到硝酸纤维素膜上,利用DNA-DNA杂交检测特定DNA片段的方法。
通过设计不同的DNA探针可实现不同等位基因类型的区分。
探针设计是Southern Blot最为重要的环节之一。
又称DNA chip/DNA微矩阵(DNA microarray)
将一系列已知序列的DNA探针分子以高密度固定于支持物上,通过与标记的DNA样品分子进行杂交实现DNA的序列分析。
优点:高通量、大规模、平行化、集约化。
缺点:非特异性高。
以上内容参考中国大学MOOC网站复旦大学遗传学。
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