提取液要趁热过滤是因为杂质在热的溶液中溶解度低,可借此除杂。
当溶液和沉淀的混合物通过过滤器(如滤纸)时,沉淀就留在过滤器上,溶液则通过过滤器而流入接收的容器。
传统意义上的过滤是指利用多孔性介质截留悬浮液中的固体粒子,进而使固、液分离的方式。菌体、细胞及其碎片等除了采用离心分离外,也可采用常规过滤法进行分离。
过滤的影响因素:
溶液的温度、黏度、过滤时的压力、过滤器的孔隙大小和沉淀物的状态都会影响过滤的速度。热的溶液比冷的溶液易过滤。溶液的黏度越大,过滤越慢。减压过滤比常压过滤快。
过滤器的孔隙要选择适当,太大会透过沉淀;太小则易被沉淀堵塞,使过滤难以进行。沉淀若呈胶状时,必须先加热一段时间来破坏它,否则它要透过滤纸。总之,要考虑各方面的因素来选用不同的过滤方法。
应该是方便后续的筛选,处理成悬浮的单细胞悬液使有发生变异和没有发生变异的细胞分开,在涂布平板可分开成单个细胞的纯的菌落,以防之后筛选出现不纯的菌落,如果将这种不纯的菌落进行育种,传代后很快会出现性状的衰退。还有就可能化学诱变剂有毒性,长时间接触致死率会过高,处理一段时间后要稀释
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1、待霉菌产孢时,向斜面试管加入5mL无菌水,把孢子刮下,倒入已灭菌的三角瓶;2、向三角瓶中加入表面活性剂;
3、将三角瓶放入摇床振荡1.5h,使孢子活化;
4、然后在3500r/min离心15min,用PH7.2磷酸缓冲洗涤一次,再用缓冲液5mL洗转入小三角瓶内(瓶中预先放置数粒无菌玻璃球),振荡10min,使孢子分散;
5、将分散的孢子液用四层灭菌的擦镜纸过滤,制成单孢子悬液;
6、镜检。
若发现其中存在孢子囊或菌丝,则向里加入蜗牛酶、几丁质酶,充分振荡,使孢子囊溶解,再用四层灭菌的擦镜纸过滤。再镜检
若未发现孢子囊或菌丝,则放置待用。
把现在制成单孢子悬液称为原浓度单孢子悬液。
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