国标编号 82504
CAS号 141-43-5
中文名称 2-氨基乙醇
英文名称 Monoethanolamine；2-Aminoethanol
别 名 乙醇胺；2-羟基乙胺
分子式 C2H7NO；HO(CH2)2NH2 外观与性状 无色液体,有氨的气味
分子量 61.08 蒸汽压 0.80kPa/60℃ 闪点：93℃
熔 点 10.5℃ 沸点：170.5℃ 溶解性 与水混溶,微溶于苯,可混溶于乙醇、四氯化碳、氯仿
密 度 相对密度(水=1)1.02；相对密度(空气=1)2.11 稳定性 稳定
危险标记 20(碱性腐蚀品) 主要用途 用作化学试剂、溶剂、乳化剂、橡胶促进剂、腐蚀抑制剂等
2.对环境的影响:
一、健康危害
侵入途径：吸入、食入、经皮吸收.
健康危害：蒸气对眼、鼻有刺激性.眼接触液状本品,造成眼损害；皮肤接触引起刺痛和灼伤.口服损害口腔和消化道.
二、毒理学资料及环境行为
急性毒性：LD502050mg/kg(大鼠经口)；1000mg/kg(兔经皮)；LC502120mg/m3,4小时(大鼠吸入)
亚急性和慢性毒性：大鼠吸入100～200mg/m3×6小时/日×5日/周,中枢神经系统抑制,条件反射改变；兔吸入24mg/m3×35日,中枢神经系统受到一定抑制,皮肤出现刺激现象.
危险特性：遇高热、明火或与氧化剂接触,有引起燃烧的危险.与硫酸、硝酸、盐酸等强酸发生剧烈反应.
燃烧(分解)产物：一氧化碳、二氧化碳、氧化氮.
3.现场应急监测方法:
4.实验室监测方法:
高效液相色谱法,参照《分析化学手册》(第四分册,色谱分析),化学工业出版社
5.环境标准:
前苏联 车间空气中有害物质的最高容许浓度 0.5mg/m3
前苏联(1975) 水体中有害物质最高允许浓度 0.5mg/L
水中嗅觉阈浓度 0.5mg/L
美国 车间卫生标准 6mg/m3
6.应急处理处置方法:
一、泄漏应急处理
疏散泄漏污染区人员至安全区,禁止无关人员进入污染区,建议应急处理人员戴好防毒面具,穿化学防护服.不要直接接触泄漏物,在确保安全情况下堵漏.用沙土或其它不燃性吸附剂混合吸收,然后收集运至废物处理场所处置.也可以用大量水冲洗,经稀释的洗水放入废水系统.如大量泄漏,利用围堤收容,然后收集、转移、回收或无害处理后废弃.
二、防护措施
呼吸系统防护：可能接触其蒸气时,佩带防毒面具.紧急事态抢救或逃生时,建议佩带自给式呼吸器.
眼睛防护：戴化学安全防护眼镜.
防护服：穿工作服(防腐材料制作).
手防护：戴橡皮手套.
其它：工作现场禁止吸烟、进食和饮水.工作后,淋浴更衣.进行就业前和定期的体检.
三、急救措施
皮肤接触：脱去污染的衣着,立即用流动清水彻底冲洗.
眼睛接触：立即提起眼睑,用流动清水或生理盐水冲洗至少15分钟.或用3%硼酸溶液冲洗.立即就医.
吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处.必要时进行人工呼吸.就医.
食入：误服者立即漱口,给饮牛奶或蛋清.就医.
灭火方法：雾状水、二氧化碳、砂土、泡沫、干粉.
乙醇胺 溶解性 与水混溶，微溶于苯，与水、甲醇、乙醇、丙酮等混溶 ，微溶于乙醚和四氯化碳。水溶液呈碱性.有极强的吸湿性,能吸收酸性气体,加热后又可将吸收的气体释放.有乳化及气泡作用.能与无机酸和有机酸生
成盐类
你打的实际是水溶液，只有0.56mL硫酸稀释到1000mL水里的浓度，一微升进样量对NPD没什么影响，一般都是怕伤柱子，所以这里柱子选择聚乙二醇丁二酸树脂键合柱。
检测限不够，一个先检查你配的标准溶液对不对，再就是烤一下铷珠，调整好基流，这个对灵敏度影响很大。
NPD灵敏度要高很多，比FID不在一个数量级上。
反相高效液相色谱法测定烟叶中的游离氨基酸氨基酸是烟草中的一类重要化学物质,在烟草调制、醇化或发酵、加工直至燃烧过程中,游离氨基酸与还原糖之间可发生酶催化及非酶催化的棕色化反应,生成多种具有蒸煮、烤香、爆米花香味特征的吡喃、吡嗪、吡咯、吡啶类等杂环化合物,某些氨基酸如苯丙氨酸还可自身分解成香味化合物,如苯甲醇、苯乙醇等.氨基酸含量与烟草制品的吃味有着密切的关系,氨基酸在燃烧裂解过程中一般形成具有刺激性的含氮化合物,对烟气香吃味产生不良影响,个别氨基酸还产生HCN等危害健康的烟气成分.一般说来,氨基酸含量太高,烟气辛辣、味苦、刺激性强烈；含量太低时烟气则平淡无味缺少丰满度.因此对氨基酸的分析是一项很有意义的工作,二十世纪60年代以来,国内外在这方面做了大量的工作[1-5].
植物游离氨基酸样品的制备,国内外采用的提取剂和纯化方法各不相同.据文献报道[6-7],盐酸、不同浓度的乙醇溶液均可以用来提取植物组织中的游离氨基酸；提取液纯化则有用阳离子交换树脂、5%磺基水杨酸、活性炭或乙醚等方法.本实验对不同的提取方式和不同的纯化方法进行了对比研究,确定提取烟叶中游离氨基酸的较佳提取剂和纯化方法.提取、纯化后的样品,采用OPA、FMOC联合柱前衍生反相高效液相色谱法对烟叶中的游离氨基酸进行了测定.该方法使带氨基和亚氨基基团的氨基酸能够被同时测定,且得到较好的定性定量结果.
1 实验
1.1 仪器
Agilent公司HP1100型高效液相色谱仪(带可变波长紫外检测器和自动进样器),PE公司Lambda Bio40 紫外-可见分光光度计.
1.2 试剂
正缬氨酸（Norvaline,内标）,OPA ,FMOC,均为色谱纯,Agilent公司提供；硼酸缓冲溶液,Agilent公司提供；
醋酸钠(NaAc),分析纯,中国医药（集团）上海化学试剂公司；三乙胺（TEA）,四氢呋喃（THF）,乙腈（CH3CN）,甲醇(MeOH),均为色谱纯,Fisher公司试剂；
氨基酸标样包括：天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、天冬酰胺（Asn）、谷氨酰胺（Gln）、丝氨酸（Ser）、组氨酸（His）、甘氨酸（Gly）、苏氨酸（Thr）、丙氨酸（Ala）、精氨酸（Arg）、酪氨酸（Tyr）、胱氨酸（Cys）、缬氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、苯丙氨酸（Phe）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、脯氨酸（Pro）,均为生化试剂,中国医药（集团）上海化学试剂公司；
苯乙烯阳离子交换树脂（732型）,天津树脂厂.
1.3 样品处理
将烟叶在烘箱中恒温40℃烘干至恒重,粉碎,过80目筛,筛下物为实验用烟样粉末,置于广口瓶中备用.准确称取烟样粉末1.000g于干燥的洁净试管中,用一定浓度的乙醇溶液室温超声波提取半小时,过滤,相同浓度的乙醇溶液洗涤,再提取一次,合并后的滤液用阳离子交换柱洗脱,然后用95ml 4mol/L氨水淋洗阳离子交换柱,淋洗液恒温浓缩至干,最后用3ml 0.1mol/L稀盐酸溶液溶解浓缩物,将此溶液离心分离20min,0.45μm微孔滤膜过滤,加入浓度为5nmol/μ1的内标10μ1,定容至50ml,HP1100液相色谱仪进行氨基酸分析.
样品自动柱前衍生化：Agilent公司G1313A自动进样器进样.程序为：吸取5μl硼酸缓冲液,再吸取1μ1 OPA试剂,洗针一次,吸取样品2μl,原位混合6次.吸取1μl FMOC试剂,洗针一次,原位混合3次,进样.
1.4 色谱条件
色谱柱：Hypersil AA-ODS C18 2.1×200mm
流动相A：1.36±0.025g醋酸钠,加入500ml纯水溶解,加90μl三乙胺,用1%醋酸调pH=7.20±0.05,再加入1.5ml四氢呋喃,混合均匀.
流动相B：1.36±0.025g醋酸钠,加入100ml纯水溶解,用1%醋酸调pH=7.20±0.05,将此溶液加至200ml乙腈和200ml甲醇的混合物中,并混合均匀.
流速：0.45ml/min
柱温：40℃
紫外检测波长: 0～16min, 338nm； 16～25min,262nm
淋洗梯度：见表1
表1 流动相的淋洗梯度表
Table 1 The gradient time table of mobile phase
序列 时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%） 流速（ml/min）
1 0.00 100.0 0.0 0.450
2 15.50 40.0 60.0 0.450
3 18.00 0.0 100.0 0.450
4 21.00 0.0 100.0 0.800
5 23.90 0.0 100.0 0.800
6 24.00 0.0 100.0 0.450
7 25.00 100.0 0.0 0.450
1.5 氮基酸的定性
用标样色谱图、文献参照和标样加入的方法,通过对照保留时间进行定性,对氨基酸的出峰顺序加以确认.
1.6 内标法定量
准确移取浓度为10 pmol/μ1、25 pmol/μ1、50 pmol/μ1、100 pmol/μ1、250 pmol/μ1、500 pmol/μ1、1000 pmol/μ1的氨基酸混合标样100μl于带内衬管的样品瓶中,再加入250pmol/μ1内标溶液100μl,充分混合,液相色谱分析,仪器自动计算各氨基酸的标准曲线.
2 结果与讨论
2.1 萃取溶剂的比较
氨基酸可溶解于水、乙醇、甲醇、稀酸等,因此它们均可作为烟叶中游离氨基酸的萃取溶剂,传统的方法是用乙醇和0.1mol/L的盐酸.实验发现,乙醇和0.1mol/L的盐酸萃取方法比较,提取出的烟叶中的游离氨基酸的总量变化不大,但用盐酸提取的样品分析时RSD%较大,平均8.51%,其中超过10%的有4个,甘氨酸的RSD%最大为20%；而用乙醇提取的样品分析时RSD%相对较小,平均5.12%,超过10%的只有1个.而且盐酸提取液过滤速度慢,需要30-40min,而乙醇提取液过滤只需10min左右；因此,本实验选择乙醇作为烟叶中游离氨基酸的萃取溶剂.
2.2 乙醇浓度的选择
选择五种不同浓度的乙醇溶液进行了烟样中游离氨基酸的提取,测定不同条件下提取液中游离氨基酸的总量,结果如图1.图中显示,在乙醇溶液浓度为80%时,烟样中总游离氨基酸的提取量最大.而且不同浓度下游离氨基酸的RSD%没有明显的变化,因此,选择80%的乙醇溶液来进行烟样中游离氨基酸的提取.
2.3 不同纯化方法的确定
在最佳乙醇溶液浓度下,分别用活性炭加入提取液吸附杂质、乙醚加入提取液萃取分离杂质、5%磺基水杨酸加入提取液沉淀去除杂质和阳离子交换树脂吸附杂质四种方法进行了纯化实验.结果发现,活性炭作为纯化剂时其色谱图中杂质峰较少,但同时氨基酸峰亦有多个消失,主要是因为活性炭对氨基酸也有较强的吸附,它在吸附杂质的同时也吸附了需要检测的氨基酸,故活性炭不适合作为纯化剂使用.乙醚和5%磺基水杨酸作为纯化剂时,杂质去除不完全,其色谱图均表现为杂质峰较多,湮没了大量氨基酸峰,且基线漂移严重,给定性定量工作带来困难.当用阳离子交换树脂进行纯化时,其色谱图中杂质峰较少,基线平稳,氨基酸峰分离较好,均可以进行定性和定量分析,故本实验选择了阳离子交换树脂作为纯化手段.
2.4 色谱分离
2.5 线性范围及标准曲线
分别取浓度为10 pmol/μ1、25 pmol/μ1、50 pmol/μ1、100 pmol/μ1、250 pmol/μ1、500 pmol/μ1、1000 pmol/μ1的氨基酸混合标样加入等体积的250 pmol/μ1的内标溶液,进行HPLC分析,以氨基酸浓度为横坐标,氨基酸与内标的面积比为纵坐标,得到各个氨基酸的标准曲线,如表2所示.从表中可以看出,各氨基酸在10-1000 pmol/μ1的浓度范围内均有良好的线性,各氨基酸标准曲线的线性相关系数均大于0.99.
表2 氨基酸的标准曲线
Table 2 Standard curves of 17 amino acids
氨基酸 线性方程 相关系数
Asp Y=0.007037x+0.004689 0.9972
Glu Y=0.007520x+0.005375 0.9961
Ser Y=0.006903x+0.038212 0.9988
His Y=0.003719x+0.020168 0.9945
Gly Y=0.005851x+0.018235 0.9966
Thr Y=0.006932x+0.021072 0.9978
Ala Y=0.006275x+0.015314 0.9912
Arg Y=0.006088x+0.016113 0.9920
Tyr Y=0.006734x+0.015022 0.9993
Cys Y=0.006004x+0.009876 0.9985
Val Y=0.006432x+0.009932 0.9927
Met Y=0.006574x+0.010346 0.9905
Phe Y=0.005098x+0.019023 0.9962
Ile Y=0.005976x+0.016235 0.9953
Leu Y=0.006044x+0.015332 0.9964
Lys Y=0.006833x+0.010437 0.9969
Pro Y=0.022455x+0.009376 0.9922
2.6 重现性实验
取云南C2F99烟样做平行实验（n=5）,进行烟叶中游离氨基酸含量的检测,结果发现： Asp和 Glu含量的RSD%分别为8.0%和8.6%,这可能是二者的分离度不高引起的；His的RSD%为9.0%,这可能与其含量较低,分离效果不好有关.其它氨基酸含量的RSD%均处在3%～7%.
2.7 回收率实验
用标样加入法进行回收率实验,结果见表3. Thr的回收率仅为68.0%,原因可能与其含量较少有关；其它15种氨基酸的回收率在81.0%～110.5%,平均回收率为93.9%,说明该方法的回收率结果令人满意.
表3 分析方法的回收率
Table 3 Recovery percents of the analytical method
氨基酸 加入量（mg/g烟样） 样品含量（mg/g烟样） 测定值（mg/g烟样） 差值（mg/g烟样） 回收率%
Asp 0.200 0.320 0.499 0.179 89.5
Glu 0.200 0.309 0.484 0.175 87.5
Asn 0.200 0.986 1.208 0.222 110.0
Ser 0.200 0.172 0.334 0.162 81.0
Gln 0.200 0.186 0.368 0.182 91.0
His 0.200 0.106 0.297 0.191 95.5
Gly 0.200 0.064 0.279 0.215 107.5
Thr 0.200 0.052 0.188 0.136 68.0
Ala 0.200 0.642 0.835 0.193 96.5
Arg 0.200 0.266 0.463 0.197 98.5
Val 0.200 0.090 0.259 0.169 84.5
Phe 0.200 0.218 0.406 0.188 94.0
Ile 0.200 0.026 0.191 0.165 82.5
Leu 0.200 0.028 0.199 0.171 85.5
Pro 0.200 1.432 1.653 0.221 110.5
Tyr 0.200 0.062 0.245 0.183 91.5
2.8 样品分析
利用该方法对不同等级的烟叶中游离氨基酸的含量进行了分析,结果见表4.从表中可以看出,在所分析的样品中,烤烟烟叶中含量最高的氨基酸是Pro,白肋烟烟叶中含量最高的氨基酸是Asp和Asn；白肋烟烟叶中氨基酸的含量高于烤烟烟叶；相同等级的烤烟烟叶,云南烟叶中的氨基酸含量高于其它产区.
表4 不同等级烟叶中游离氨基酸的含量（mg/g烟样）
Table 4 Amounts of free amino acids in different
grade tobacco leaves（mg/g tobacco leaves）
氨基酸 云南烤烟C1F 云南烤烟C2F 云南烤烟C1L 云南烤烟B1F 云南烤烟B2F 福建烤烟B1F 福建烤烟C1F 四川烤烟C1F 四川烤烟B1F 贵州烤烟C1F 贵州烤烟B1F 贵州烤烟C1L 鄂西白肋中一 鄂西白肋中二
Asp 0.24 0.31 0.60 0.40 0.38 0.37 0.26 0.37 0.26 0.26 0.32 0.35 1.73 1.59
Glu 0.36 0.32 0.21 0.17 0.16 0.11 0.15 0.20 0.30 0.32 0.29 0.25 0.54 0.61
Asn 0.91 0.34 1.50 0.95 0.38 0.18 0.25 0.35 0.32 0.44 0.55 0.48 7.70 7.62
Ser 0.16 0.10 0.18 0.16 0.10 0.12 0.24 0.21 0.19 0.20 0.19 0.15 0.62 0.58
Gln 0.19 0.05 0.22 0.17 0.04 0.06 0.10 0.11 0.10 0.11 0.15 0.10 0.18 0.20
His 0.11 0.02 0.14 0.10 0.06 0.06 0.11 0.09 0.07 0.09 0.08 0.09 0.20 0.22
Gly 0.10 0.09 0.19 0.17 0.07 0.08 0.12 0.15 0.12 0.15 0.13 0.12 0.16 0.19
Thr 0.05 0.05 0.08 0.06 0.05 0.04 0.08 0.09 0.08 0.07 0.06 0.05 0.19 0.16
Ala 0.65 0.55 0.84 0.69 0.54 0.51 0.65 0.59 0.55 0.48 0.53 0.70 0.57 0.55
Arg 0.29 0.21 0.32 0.28 0.18 0.26 0.32 0.28 0.25 0.33 0.29 0.33 0.48 0.42
Tyr 0.06 0.07 0.06 0.07 0.06 0.05 0.07 0.05 0.06 0.06 0.07 0.06 0.10 0.15
Val 0.10 0.10 0.12 0.11 0.10 0.14 0.15 0.13 0.12 0.15 0.14 0.13 0.21 0.25
Met 0.07 0.07 0.09 0.08 0.06 0.06 0.08 0.08 0.08 0.07 0.09 0.08 0.12 0.13
Phe 0.26 0.12 0.28 0.23 0.10 0.21 0.25 0.21 0.25 0.28 0.30 0.33 0.44 0.59
Pro 1.14 0.83 2.13 1.51 0.69 0.66 1.03 1.23 1.11 1.32 1.18 1.09 0.25 0.35
总量 4.69 3.23 6.96 5.15 2.97 2.91 3.86 4.14 3.86 4.33 4.37 4.31 13.49 13.61
3 结论
本烟叶中游离氨基酸的分析方法采用80%的乙醇作为萃取溶剂,阳离子交换树脂对提取液进行纯化,能够最大程度地提取烟叶中的游离氨基酸并较好地去除了影响氨基酸测定的杂质,使色谱图中杂质峰较少；OPA、FMOC联和柱前衍生使带氨基和亚氨基基团的氨基酸同时得到测定；良好的梯度洗脱使各个氨基酸峰得到较好的分离,并使定量结果更加可靠.
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