血凝实验的间接Coombs试验_备孕

Coombs试验除了广泛应用于血液病的检测外，还可采用专一特异性的抗球蛋白的血清如IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体的免疫球亚类。

有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。 [目的要求]

掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。

[材料与试剂]

1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50L定量移液器，滴头，微型振荡器。

2. 生理盐水，0.5% 鸡红细胞悬液。

3. 新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。

[实验内容及操作方法] 1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50L生理盐水。

2. 于左侧第1孔加50L病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50L至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50L；第12孔为红细胞对照。

3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 鸡红细胞悬液50L，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。

表 4-1 病毒血凝试验的操作方法（单位：L）

孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

病毒稀释度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对照

生理盐水 50

病毒液 50

0.5%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50

弃50

结果观察 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ + + - -

4. 结果判定：

从静置后10 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。

以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。

(1)阳性见于AIHA，直接Coombs’试验较间接试验对AIHA更有诊断价值。用特异性单价抗血清可将AIHA分为三型：IgG/C3阳性，占67%；单独IgG性，占20%；单独C3性，占13%；(2)药物免疫性溶血性贫血及同种免疫性溶血性贫血也可阳性。(3)Coombs’试验阴性有时并不能排除AIHA。（4）10%的coombs阳性者可见于慢性淋巴细胞白血病。[要求]用肝素或EDTA抗凝血做直接Coombs’试验，血清做间接Coombs’试验。[注意事项] 受检血标本必须新鲜；洗涤后的红细胞和器材都不能残留有血浆蛋白，以免出现假阴性。

Coombs试验即抗人球蛋白试验，是检测血液中温反应性抗体的一种方法，也是诊断自身免疫性溶血性贫血的重要指标。温抗体中50%以上由IgG介导，其次为IgM，IgA和C3d等，因此本试验应分选各种单克隆抗体同时测定。Coombs试验分为直接试验（直接反应）和间接试验（间接反应）：直接试验的目的是检查红细胞表面的不完全抗体；间接试验的目的是检查血清中存在游离的不完全抗体。实验阳性提示存在不规则抗体，根据这个检查结果来看，很有可能是患了自身免疫性溶血性贫血：这是多种原因引起体内产生红细胞抗体和补体结合于红细胞表面，导致红细胞破坏加速的溶血性贫血，抗人球蛋白试验（Coombs）阳性。该患者应该到医院的血液科就诊，还要做一个周围红细胞形态检查，可能患了自身免疫性溶血性贫血。输血要在确诊后才能知道是否可以进行。

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