分离胶和浓缩胶的区别是什么

分离胶和浓缩胶的区别是什么,第1张

一、性质不同

1、浓缩胶:在不连续聚丙烯 酰胺凝胶电泳中,同一介质的凝胶浓度分为 两种,负极的加样侧一般浓度为2%〜5%。

2、分离胶:不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳中的一部分,其组成、缓冲液pH和凝胶孔径与浓缩凝胶不同。它具有分子筛效应的小孔径凝胶。

二、过程不同

1、浓缩胶过程:由于浓缩胶浓度低、孔径大,分离胶浓度高,孔径小。带电蛋白质或核酸离子在大孔径凝胶中运动时,阻力小,运动速度快。当接近小孔径凝胶时,阻力较大,移动速度减慢,使样品浓缩,形成窄带,减少电泳过程中的带扩散。

2、分离胶过程:蛋白质或核酸在电泳过程中由浓缩胶进入分离胶,由于分子筛的作用,小分子物质容易通过,阻力小,迁移速度快。大分子由于较大的电阻而滞后。因此,即使具有类似净电荷和相等的游泳率的物质,也会根据分子量的不同而通过分子筛效应从凝胶中分离出来。

扩展资料:

浓缩胶的作用有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径大。将较细的样品加入到浓缩胶中,通过大孔凝胶的迁移浓缩到窄的区域。当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离少量甘氨酸自由基离子。

蛋白质带负电,所以它们一起移动到正极。氯离子是最快的,甘氨酸是最慢的,蛋白质在中间。电泳开始时,氯离子游动速率最高,超过蛋白质,在电泳的背面形成一个低电导区,电场强度与低电导区成反比,从而产生较高的电场强度。

使蛋白质和甘氨酸离子快速运动,形成稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。大大提高了电泳的灵敏度。

参考资料来源:百度百科-浓缩胶

参考资料来源:百度百科-分离胶

浓缩胶是在不连续聚丙烯 酰胺凝胶电泳中,同一介质的凝胶浓度分为 两种,负极的加样侧一般浓度为2%〜5%, 称为浓缩胶,其余部分浓度为6%〜8%, 称为分离胶。由于浓缩胶浓度低、孔径大, 而分离胶浓度高、孔径小。带电荷的蛋白质 或核酸离子在大孔径胶中移动时阻力小,移动速度快,当接近小孔径的分离胶时,遇到的阻力大,移动速度减慢而使样品浓缩,形 成一条狭窄区带,以减少电泳过程中的谱 带扩散。浓缩胶与分离胶的pH值不同也呵 以强化样品的浓缩作用。浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成以稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。大大提高了电泳的灵敏度。


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