touch down PCR的程序是怎么样的？

就是在设置退火那一步时，大部分机器都自带一个程序，你可以每个循环降低或增加多少度，例如你设置的是每循环减少0.5度，起始退火温度是60度，那么第二个循环就是59.5度，第三个循环就是59度，依次递减，增加也可以

touchdown PCR是为了增加反应的特异性，降低非特异产物的产生。在整个反应过程是一个温度由高到低的过程，在温度降低的过程中，会出现一个温度是上下游引物最适的退火温度，大量引物与模板结合，由此产生特异性产物；温度继续降低时，未结合的引物已很少或没有，非特异性产物就很少或没有。

设置温度时，高温以Tm较高的引物为准，低温以Tm较低的引物为准.

我常用的程序是：65C----50C, 1C/2s(2s 降低1度）

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