双口微波网络的散射参量的测量在微波网络参数中有何重要意义

网络分析仪一种能在宽频带内进行扫描测量以确定网络参量的综合性微波测量仪器。全称是微波网络分析仪。网络分析仪是测量网络参数的一种新型仪器，可直接测量有源或无源、可逆或不可逆的双口和单口网络的复数散射参数，并以扫频方式给出各散射参数的幅度、相位频率特性。自动网络分析仪能对测量结果逐点进行误差修正，并换算出其他几十种网络参数，如输入反射系数、输出反射系数、电压驻波比、阻抗（或导纳）、衰减（或增益）、相移和群延时等传输参数以及隔离度和定向度等。

矢量网络分析仪,它本身自带了一个信号发生器，可以对一个频段进行频率扫描 如果是单端口测量的话，将激励信号加在端口上，通过测量反射回来信号的幅度和

网络分析仪 (5张)

相位，就可以判断出阻抗或者反射情况 而对于双端口测量，则还可以测量传输参数 由于受分布参数等影响明显，所以网络分析仪使用之前必须进行校准。

在微波电路的设计和计算中，需要对所用元、器件特性的全部网络参数进行全面定值。而微波元、器件中，包括微波晶体管，大多采用S参数（散射参数）来表述它们的特性。一般二端口网络需要有四个散射参数（S11、S22、S12和S21），才能对其全面定值。因此往往采用测量的方法来确定网络的参数。

20世纪60年代中期，出现能在宽频带范围内扫频测量并能显示全部网络S参数的模值和幅角的多功能仪器，这就是微波网络分析仪。因此网络分析仪的基本部分实际上就是一台S参数测量仪。方框图如图2所示。

图2 网络分析仪框图

由于测定了网络的S参数后，网络的其它各种特性参量都可以从S参数中导出，因此，微波网络分析仪具有多种功能。

发展过程编辑

网络分析仪是在四端口微波反射计（见驻波与反射测量）的基础上发展起来的。在60年代中期实现自动化，利用计算机按一定误差模型在每一频率点上修正由定向耦合器的定向性不完善、失配和窜漏等而引起的误差，从而使测量精确度大为提高，可达到计量室中最精密的测量线技术的测量精确度，而测量速度提高数十倍。

原理编辑

一个任意多端口网络的各端口终端均匹配时，由第n个端口输入的入射行波 an将散射到其余一切端口并 发射出去。若第m个端口的出射行波为bm,则n口与m口之间的散射参数Smn=bm/an。一个双口网络共有四个散射参数 S11、S21、S12和S22。当两个终端均匹配时，S11和S22就分别是端口1和2的反射系

网络分析仪

数,S21是由1口至2口的传输系数，S12则是反方向的传输系数。当某一端口m终端失配时,由终端反射回来的行波又重新进入m口。这可以等效地看成是m口仍是匹配的，但有一个行波am入射到m口。这样，在任意情况下都可以列出各口等效入射、出射行波与散射参数之间关系的联立方程组。据此可以解出网络的一切特性参数,如终端失配时的输入端反射系数、电压驻波比、输入阻抗以及各种正向反向传输系数等。这就是网络分析仪的最基本的工作原理。单端口网络可视为双口网络的特例，在其中除S11之外，恒有S21=S12=S22。对于多端口网络,除了一个输入和一个输出端口之外,可在其余一切端口都接上匹配负载，从而等效为一个双端口网络。轮流选择各对端口作为等效双口网络的输入、输出端，进行一系列测量并列出相应的方程,即可解得n端口网络的全部n2个散射参数,从而求出n端口网络的一切特性参数。图左为四端口网络分析仪测量S11时测试单元的原理示意，箭头表示各行波的路径。信号源 u输出信号经开关S1和定向耦合器D2输入到被测网络的端口1，这就是入射波a1。端口1的反射波(即1口的出射波b1)经定向耦合器 D2和开关传到接收机的测量通道。信号源u的输出同时经定向耦合器D1传到接收机的参考通道，这个信号是正比于a1的。于是双通道幅度-相位接收机就测出b1/a1，即测出S11,包括其幅值和相位（或实部和虚部）。测量时,网络的端口2接上匹配负载R1，以满足散射参数所规定的条件。系统中的另一个定向耦合器D3也终接匹配负载R2,以免产生不良影响。其余三个S 参数的测量原理与此类同。图右为测量不同Smn参数时各开关应放置的位置。

在实际测量之前，先用三个阻抗已知的标准器（例如一个短路、一个开路和一个匹配负载）供仪器进行一系列测量，称为校准测量。由实测结果与理想（无仪器误差时）应有的结果比对，可通过计算求出误差模型中的各误差因子并存入计算机中，以便对被测件的测量结果进行误差修正。在每一频率点上都按此进行校准和修正。测量步骤和计算都十分复杂，非人工所能胜任。

上述网络分析仪称为四端口网络分析仪，因为仪器有四个端口，分别接到信号源、被测件、测量通道和测量的参考通道。它的缺点是接收机的结构复杂，误差模型中并未包括接收机所产生的误差。

参数编辑

参数（散射参数）用于评估 DUT 反射信号和传送信号的性能。 参数由两个复数之比定义，它包含有关信号的幅度和相位的信息。 参数通常表示为：

输出 输入

输出：输出信号的 DUT 端口号

输入：输入信号的 DUT 端口号

例如，参数 S21 是 DUT 上端口 2 的输出信号与 DUT 上端口 1 的输入信号之比，输出信号和输入信号都用复数表示。

当启动平衡 - 不平衡转换功能时，可以选择混合模 S 参数。

新发展编辑

1973年又研制出六端口网络分析仪。它利用一个由定向耦合器和混合接头（魔 T）组成的六端口网络作为测量单元，除二个端口分别接信号源和被测件之外，其余四个端口均接到幅值检波器或功率计。通过检出的四个幅值的适当组合，可以求出被测网络散射参数的模和相位。它不必使用复杂的双通道接收机来取得相位信息，从而使测量系统的硬件大为简化。此外，它有超过必需数目的冗余测量端口，可以利用冗余数据之间互相核对来提高测量结果的可信性。但它的计算工作比四端口网络分析仪要复杂得多。采用双六端口网络分析仪来测量双端口网络，即用一个六端口网络仪接在被测网络的端口1，另一个接在端口2，可在测量过程中避免开关转换或人工倒转被测网络的输入端和输出端，进一步提高了测量的精确度。

流式细胞仪可同时进行多参数测量，信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的，所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞通过测量区时，受到激光照射会向立体角为2π的整个空间散射光线，散射光的波长和入射光的波长相同。散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关，因为这些生物学参数又和细胞对光线的反射、折射等光学特性有关。未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射，因此可利用不同的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选。经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变，其散射光信号当然不同于活细胞。散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数相关，还跟散射角、及收集散射光线的立体角等非生物因素有关。

在流式细胞术测量中，常用的是两种散射方向的散射光测量：①前向角（即0角）散射（FSC）；②侧向散射（SSC），又称90角散射。这时所说的角度指的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向之间大致所成的角度。一般说来，前向角散射光的强度与细胞的大小有关，对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大；对球形活细胞经实验表明在小立体角范围内基本上和截面积大小成线性关系；对于形状复杂具有取向性的细胞则可能差异很大，尤其需要注意。侧向散射光的测量主要用来获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的有关信息。侧向散射光虽然也与细胞的形状和大小有关，但它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感，也能对细胞质内较大颗粒给出灵敏反映。

在实际使用中，仪器首先要对光散射信号进行测量。当光散射分析与荧光探针联合使用时，可鉴别出样品中被染色和未被染色细胞。光散射测量最有效的用途是从非均一的群体中鉴别出某些亚群。

荧光信号主要包括两部分：①自发荧光，即不经荧光染色细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光；②特征荧光，即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光，其荧光强度较弱，波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中，对于结合水平不高的荧光抗体来说，如何提高信噪比是个关键。一般说来，细胞成分中能够产生的自发荧光的分子（例核黄素、细胞色素等）的含量越高，自发荧光越强；培养细胞中死细胞/活细胞比例越高，自发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的比例越高，自发荧光越强。

减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是：①尽量选用较亮的荧光染料；②选用适宜的激光和滤片光学系统；③采用电子补偿电路，将自发荧光的本底贡献予以补偿。

样品分选原理流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的。总的过程是：由喷嘴射出的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液体被当作废液抽吸掉，某些类型的仪器也有采用捕获管来进行分选的。

稳定的小液滴是由流动室上的压电晶体在几十KHz的电信号作用下发生振动而迫使液流均匀断裂而形成的。一般液滴间距约数百μm。实验经验公式f=v/45d给出形成稳定水滴的振荡信号频率。其中v是液流速度，d为喷孔直径。由此可知使用不同孔径的喷孔及改变液流速度，可能会改变分选效果。使分选的含细胞液滴在静电场中的偏转是由充电电路和偏转板共同完成的。充电电压一般选+150V，或-150V；偏转板间的电位差为数千伏。充电电路中的充电脉冲发生器是由逻辑电路控制的，因此从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要一段延迟时间，一般为数十ms。精确测定延迟时间是决定分选质量的关键，仪器多采用移位寄存器数字电路来产生延迟。可根据具体要求予以适当调整。

（50）数据处理原理：FCM的数据处理主要包括数据的显示和分析，至于对仪器给出的结果如何解释则随所要解决的具体问题而定。

①数据显示：FCM的数据显示方式包括单参数直方图、二维点图、二维等高图、假三维图和列表模式等。

直方图是一维数据用作最多的图形显示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析，形同一般X—Y平面描图仪给出的曲线。根据选择放大器类型不同，坐标可以是线性标度或对数标度，用“道数”来表示，实质上是所测的荧光或散射光的强度。坐标一般表示的是细胞的相对数。图10-2给出的是直方图形式。只能显示一个参数与细胞之间的关系是它的局限性。

二维点图能够显示两个独立参数与细胞相对数之间的关系。坐标和坐标分别为与细胞有关的两个独立参数，平面上每一个点表示同时具有相应坐标值的细胞存在。可以由二维点图得到两个一维直方图，但是由于兼并现象存在，二维点图的信息量要大于二个一维直方图的信息量。所谓兼并就是说多个细胞具有相同的二维坐标在图上只表现为一个点，这样对细胞点密集的地方就难于显示它的精细结构。

二维点图二维等高图类似于地图上的等高线表示法。它是为了克服二维点图的不足而设置的显示方法。等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数，即“等高”。曲线层次越高所代表的细胞数愈多。一般层次所表示的细胞数间隔是相等的，因此等高线越密集则表示变化率越大，等高线越疏则表示变化平衡。图10-4给出了二维等高图的样式。

假三维图是利用计算机技术对二维等高图的一种视觉直观的表现方法。它把原二维图中的隐坐标—细胞数同时显现，但参数维图可以通过旋转、倾斜等 *** 作，以便多方位的观察“山峰”和“谷地”的结构和细节　，这无疑是有助于对数据进行分析的。

假三维图列表模式其实只是多参数数据文件的一种计算机存贮方式，三个以上的参数数据显示是用多个直方图、二维图和假三维图来完成的。可用ListMode中的特殊技术，开窗或用游标调出相关部分再改变维数进行显示。例如，“一调二”就是在一维图上调出二维图来；“二调一”就是从二维图中调出一维图来。图10-6给出了从二维图等高图中调出相应窗口的直方图的示意图。

图10-6　从二维图设窗调出直方图示意上面简要地介绍了几种数据显示形式，在实际应用中，可根据需要选择匹配，以便了解和获得尽可能多的有用信息。

②数据分析：数据分析的方法总的可分为参数方法和非参数方法两大类。当被检测的生物学系统能够用某种数学模型技术时则多使用参数方法。数学模型可以是一个方程或方程组，方程的参数产生所需要的信息来自所测的数据。例如在测定老鼠精子的DNA含量时，可以获取细胞频数的尖锐波形分布。如果采用正态分布函数来描述这些数据，则参数即为面积、平均值和标准偏差。方程的数据拟合则通常使用最小二乘法。而非参数分析法对测量得到的分布形状不需要做任何假设，即采用无设定参数分析法。分析程序可以很简单，只需要直观观测频数分布；也可能很复杂，要对两个或多个直方图逐道地进行比较。

逐点描图（或用手工，或用描图仪、计算机系统）是大家常用的数据分析的重要手段。我们常可以用来了解数据的特性、寻找那些不曾预料的特异征兆、选择统计分析的模型、显示最终结果等。事实上，不经过先对数据进行直观观察分析就决不应该对这批数据进行数值分析。从这一点来看，非参数分析是参数分析的基础。

逐道比较工作量较大，但用直观法很容易发现明显的差异，特别是对照组和测试组。考虑到FCM的可靠性，要注意到对每组测量，都要有对照组，对照组可以是空白对照组、阴性对照组、或零时刻对照组等，具体设置应根据整体实验要求而定。对照组和测试组的逐道比较往往可以减少许多不必要的误差和错误解释。顺便指出，进行比较时对曲线的总细胞数进行归一化处理，甚至对两条曲线逐道相减而得到“差结果曲线”往往是适宜的。

因为数据分析往往和结果解释关系十分密切，也就是说和生物学背景相关，因此具体的分析法和原理将在后面结合实例再介绍。

转自：>

维生素C不同的测定方法

目前研究维生素C测定方法的报道较多,有关维生素C的测定方法如荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等,各种方法对实际样品的测定均有满意的效果

为了解国内VC含量测定方法及其应用方面的现状及发展态势方法以"维生素C或抗坏血酸和测定"为检索词对1994～2002年中国期刊网全文数据库(CNKI)中的理工A、B和医卫生专辑进行篇名检索,对所得有关维生素C含量测定的文献数据分别以年代、作者区域、载刊等级、样品类型、测定方法等进行计量分析结果核心期刊载刊文献占文献总量的4506％,其中光度法占6569％,电化法占1863％,色谱法占1275％;复杂被测样品文献占文献总量的4506％,其中光度法占6092％,色谱法占1954％,电化法占1034％结论目前国内维生素C含量测定仍以光度法为主流,但近年来色谱法,特别是HPLC法上升趋势尤为明显

一．荧光法

1．原理

样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。

脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0022 g/ml。

2．适用范围

本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定

3 注意事项

31 大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸-醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生C。

32 某些果胶含量高的样品不易过滤，可采用抽滤的方法，也可先离心，再取上清液过滤。

33活性炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，但它也有吸附抗坏血酸的作用，故活性炭用量应适当与准确，所以，应用天平称量。我们的实验结果证明，用2g活性炭能使测定样品中还原型抗坏血酸完全氧化为脱氢型，其吸附影响不明显。

二、2，6-二氯靛酚滴定法（还原型VC）

1、原理：

还原型抗坏血酸还原染料2，6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2，6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。本法用于测定还原型抗坏血酸，总抗坏血酸的量常用2，4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定。

2、注意事项

⑴ 所有试剂的配制最好都用重蒸馏水；

⑵ 滴定时，可同时吸二个样品。一个滴定，另一个作为观察颜色变化的参考；

⑶ 样品进入实验室后，应浸泡在已知量的2%草酸液中，以防氧化，损失维生素C；

⑷ 贮存过久的罐头食品，可能含有大量的低铁离子（Fe2+），要用8%的醋酸代替2%草酸。这时如用草酸，低铁离子可以还原2，6-二氯靛酚，使测定数字增高，使用醋酸可以避免这种情况的发生；

⑸ 整个 *** 作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧化；

⑹ 在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴辛醇消除；

⑺ 测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣除空白体积。

3优点：它具有简便、快速、比较准确等优点，适用于许多不同类型样品的分析。缺点是不能直接测定样品中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量，易受其他还原物质的干扰。如果样品中含有色素类物质，将给滴定终点的观察造成困难。在酸性环境中，抗坏血酸（还原型）能将染料2,6—DCIP还原成无色的还原型2,6—DCIP，而抗坏血酸则被氧化成脱氢抗坏血酸。氧化型2,6—DCIP在中性或碱性溶液中呈蓝色，但在酸性溶液中则呈粉红色。因此，当用2,6—DICP滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸未被全部氧化前，滴下的2,6—DCIP 立即被还原成无色，一旦溶液中的抗坏血酸全部被氧化时，则滴下微量过剩的2,6—DCIP 便立即使溶液显示淡粉红色或微红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的抗坏血酸刚刚全部被氧化。依据滴定时2,6—DCIP 标准溶液的消耗量 (ml)，可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量。氧化型2,6—DCIP与还原型抗坏血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中进行反应。即先将样品溶于一定浓度的酸性溶液中或经抽提后，再用2,6—DCIP标准溶液滴定至终点。

食物和生物材料中常含有其他还原物质，其中有些还原物质可使2,6—DCIP还原脱色。为了消除这些还原物质对定量测定的干扰，可用抗坏血酸氧化酶处理，破坏样品中还原型抗坏血酸后，再用2,6—DCIP 滴定样品中其他还原物质。然后从滴定未经酶处理样品时2,6—DCIP标准溶液的总消耗量中，减去滴定非抗坏血酸还原物质2,6—DCIP 标准溶液的消耗量，即为滴定抗坏血酸实际所消耗的2,6—DCIP标准溶液的体积，由此可以计算出样品中抗坏血酸的含量。另外，还可利用抗坏血酸和其他还原物质与2,6—DCIP反应速度的差别，并通过控制样品溶液在pH1 — 3 范围内，进行快速滴定，可以消除或减少其他还原物质的作用，一般在这样的条件下，干扰物质与2,6—DCIP的反应是很慢的或受到抑制。生物体液（如血液、尿等）中的抗坏血酸的测定比较困难，因为这些样品中抗坏血酸的含量很低，并且存在许多还原物质的干扰，同时还必须预先进行脱蛋白处理。在生物体液中含有巯其、亚硫酸盐及硫代硫酸盐等物质，它们都能与DCIP反应，但反应速度比抗坏血酸慢得多。样品中巯基物质对定量测定的干扰，通常可以藉加入对—氯汞苯甲酸(简称PCMB)而得到消除。

三、2，4-二硝基苯肼法

1．原理

总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸。样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。

2．适用范围

本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。

这是脎比色法，单独评价是因为目前它作为Vc测定的国标法之一，是一种全量测定法，它跟以前的苯肼法原理相近。首先将样品中的还原型V氧化为脱氢型V，然后与2，4—二硝基苯肼作用，生成红色的脎，将脎溶于硫酸后进行比色。最近国标中该法强调空白，每个样品及标准系列均需作对应空白，这样消除色泽、背景不一的误差。在实际杨梅汁Vc测定中， *** 作时间长， *** 作要求较严格，试剂较多，就一般实验室而言是目前可以采用的方法。

四 碘量法

1、维生素C的原理

维生素C包括氧化型、还原型和二酮古乐糖酸三种。当用碘滴定维生素C时，所滴定的碘被维生素C还原为碘离子。随着滴定过程中维生素C全被氧化，所滴入的碘将以碘分子形式出现。碘分子可以使含指示剂（淀粉）的溶液产生蓝色，即为滴定终点。

2、注意事项

（1）看到红棕色出现时要放慢滴定的速度。

（2）以显蓝色在30s内不褪色为滴定终点。

五L-抗坏血酸(维生素C)测定试剂盒（酶学方法）

应用于食品，饮料及生物制品检测

2比色方法

此方法用于检测水果和蔬菜（如马铃薯），水果和蔬菜产品（如西红柿酱、泡菜、果酱、果汁），婴儿食品，啤酒，饮料，流食，粉状和烘烤剂，肉产品，奶制品，葡萄酒，还有动物饲料，医品（如维生素配制、阵痛、退烧）和生物样品中的L-抗坏血酸(维生素C)，

3分析物

L-抗坏血酸不定量的分布于动物和植物中。人类不能自身生产L-抗坏血酸，因此必须由外源(vitamin C)提供。一般情况下来源于水果和蔬菜中，出于技术原因，L-抗坏血酸曾被用于食品工业中的抗氧化剂。它是一种相对敏感的物质，L-抗坏血酸的检测非常适用于从原始水果和蔬菜中加工食品的质量评定。

L-抗坏血酸用于医品生产中的组成部分，如维生素产品和阵痛，另外，它还用于动物饲料添加剂中。

4原理

L-抗坏血酸 (x-H2) + MTT+ PMS—> dehydroascorbate (x) + MTT-formazan + H+X

L-抗坏血酸 + O2  AAO——> dehydroascorbate + H2OX

5特异性

在给定的条件下，此方法特别针对于L-抗坏血酸。合成的D-阿拉伯抗坏血酸/阿拉伯糖型抗坏血酸能作为抗氧化剂，也能反应，但反应速度较慢。

6灵敏度

测定灵敏度为0005个吸光度单位，样品体积为1600ml，此相当于01mg/l样品溶液中的L-抗坏血酸浓度。0015个吸光度单位的差异能造成03 mg/l检测限，样品最大体积为1600 ml。

7线性

测定的线性范围为05 ugL-抗坏血酸（03mgL-抗坏血酸/l样品溶液体积为1600ml）到20 ugL-抗坏血酸（02gL-抗坏血酸/l样品溶液体积为0100ml）

8精密度

在用一个样品做重复实验时，可能会产生0005-0010个吸光度单位的差异。标准的相对偏差（变异系数）大约为1-3%。当分析检测数据时，要考虑到L-抗坏血酸的水溶液稳定性较差，尤其是重金属离子或氧存在时。

9干扰及错误来源

粮食的成分不经常干扰实验。高浓度的酒精和D-山梨酸醇能降低反应速度，大量的亚硫酸盐必须通过添加甲醛来去除。醋酸抑制酶AAO。金属和 亚硫酸盐离子可以导致L-抗坏血酸的自发分解。

10试剂盒包括内容

磷酸盐/柠檬酸缓冲液  ————   pH值大约35；MTT

2AAO（坑坏血酸-氧化酶）——    每板约17 U AAO

3 PMS 溶液

六．磷钼蓝分光光度法测定维生素C

基于在一定的反应条件下，维生素C可以定量地将磷钼酸锭还原成磷钼蓝，提出了一种新的测定维生素C的分光光度法。该方法很方便、快速地测定生物、物等试样中的维生素C，准确度和重复性均达到令人满意的程度。

1 适用范围

本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定(不含二价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐),不适用于深色样品。

2 测定原理

染料2,6－二氯靛酚的颜色反应表现两种特性,一是取决于其氧化还原状态,氧化态为深蓝色,还原态变为无色;二是受其介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色,在酸性介质中呈浅红色。

用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素 C的酸性浸出液进行氧化还原滴定,染料被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。

七二甲苯－二氯靛酚比色法

1 适用范围

测定深色样品中还原型抗坏血酸。

2 测定原理

用定量的 2,6－二氯靛酚染料与试样中的维生素 C进行氧化还原反应,多余的染料在酸性环境中呈红色,用二甲苯萃取后比色,在一定范围内,吸光度与染料浓度呈线性相关,收剩余染料浓度用差减法计算维生素 C含量。

八近红外漫反射光谱分析法(NIRDRSA)

自1965年首次应用于复杂农业样品分析后，因其具 有样品处理简单、分析速度快等优点，逐渐受到分析界的重视。此法已广泛应用于石油、纺 织、农业、食品、物分析等领域[1，2]。在物分析中，NIRDRSA可以进行定性 鉴别、定量分析等工作。

维生素C是一种不稳定的二烯醇化合物，其典[3]含量测定方法为碘量法。我 们采用近红外漫反射光谱技术直接测定维生素C含量，样品无需预处理，方法简便，结果可 靠。

这是因为，近红外谱区光的频率与有机分子中C-H，O-H，N-H等振动的合频与各级倍频的 频率一致，因此通过有机物的近红外光谱可以取得分子中C-H，O-H，N-H的特征振动信息 。由于近红外光谱的谱带较宽，谱图重叠严重，不能用特征峰等简单方法分析，需要运用计 算机技术与化学计量学方法。本实验应用的是偏最小二乘法(PLS)[4]，首先利用 定标集建立预测模型，然后将预测集作为未知样本，根据预测模型进行预测。

对所选择的谱区范围，采用对反射吸光度的MSC(散射校正)预处理，对25个样品进行交叉 验证，即选择一个样品，从校正集中除去该样品对应的光谱和浓度数据，并设光谱主成分数 为1，循环迭代样品数和主成分数，计算预测残差平方和,确定所需主成分数。若主成分选择 过小，会丢失样品信息，过大会造成过度拟合。当主因子为2时，预测残差平方和值最小， 为2029，故选择主因子数为2，建立最佳PLS校正数学模型。

九 电位滴定法

原理：根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反应终点

Pt为指示电极，甘汞作参比电极

E池＝E+-E-+E液接电位＝EI2/I-+k(常数)

2原理(具体来说:)

随着滴定剂的加入，由于发生化学反应，待测离子浓度将不断变化；从而指示电极电位发生相应变化；导致电池电动势发生相应变化；计量点附近离子浓度发生突变；引起电位的突变，因此由测量工作电池电动势的变化就能确定终点。

3计算式：(与碘量法相同) Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) 100%

4优点：

解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题

用线性电位滴定法分析抗坏血酸,抗坏血酸回收率为9980％～1015％,相对标准偏差为061％;分析维生素C片中的抗坏血酸,相当标示量为9890％～1005％,相对标准偏差不大于048％,说明线性电位滴定法分析维生素C片中的抗坏血酸含量是可行的

十 分光光度法

原理：

维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸，pH>5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸。脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎

脎在500nm波长有最大吸收

根据样品溶液吸光度，由工作曲线查出VC的浓度，即可求出VC的含量

十一 库仑滴定法

原理：库仑滴定法属于恒电流库仑分析。

是在特定的电解液中，以电极反应产物为滴定剂（电生滴定剂，相当于化学滴定中的标准浓液）与待测物质定量作用，借助指示剂或电位法确定滴定终点。

2基本依据－－法拉第电解定律：电解时，电极上发身化学反应的物质质量与通过电解池的电量Q成正比

即：            m=MQ/zF =  MI t /zF      

3化学反应：阴极反应： 2H+2e-=H2 阳极反应： 2I-=I2+2e-

4终点指示：多种方法

(1)化学指示剂－－I2

(2)电位法

(3)双铂极电流指示法

5计算式：Wvc=MvcQ/zFm样式中： F--- 法拉第常数（96487C）

Z---电极反应中转移的电子数注意：使电解效率100％

6优点：

1）无需标准化的试剂溶液，免去了大量的标准物质的准备工作（配制，标定）

2）只需要一个高质量的供电器，计时器，小铂丝电极，且易于实现自动化控制  

3）若电流维持一个定值，可大大缩短了电解时间

4）电量容易控制及准确测量；方法灵敏度，准确度较高

5）滴定剂来自电解时的电极产物，可实现容量分析中不易实现的滴定过程，如Cu＋,Br2,Cl2产生后立即与待测物反应。  

7缺点(难点)：

要求电解过程没有副反应和漏电现象，即使电解电极上只进行生成滴定剂的反应，且电流的效率是100％

8注：电流效率＝i样÷i总＝ i样÷（ i样＋ i容＋i杂）

因为：实际电解过程中存在影响电流效率的因素，如，杂质，溶剂，电极自身在电极上的反应等

十二 紫外快速测定法

原理

维生素C的2，6—二氯酚靛酚容量法， *** 作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量。

十三 光电比浊法的原理

原理

在酸性介质中,抗坏铁酸与亚硒酸(H2SeO3)能定量地进行氧化还原反应1mol的抗铁酸能将2mol的亚硒酸还原成硒在一定条件下,生成的元素硒在溶液中形成稳定的悬浊液当抗铁酸的浓度在0-4mg/25-50ml的范围内,该溶液生成的浊度与抗坏铁酸的含量成正比将试液置分光光度计上测其浊度可以定量地测定抗坏铁酸

十四荧光分析法的原理

原理

用酸洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式脱氢抗坏铁酸,然后与邻苯二胺缩合成一种荧光性化合物样品中其它荧光杂质的干扰可以通过向氧化后的样品中加入硼酸,使脱氢抗坏铁酸形成 硼酸脱氢抗坏铁酸的络合物,它不与邻二苯胺生成荧光化合物这样可以测定其它荧光杂质的空白荧光强度而加以校正

十五 原子吸收间接测定法

原理

这是最近报导的一种Vc测定法，其原理是在酸性介质中还原型Vc可将Cu2+定量地还原为Cu+并与SCN—反应生成CuSCN沉淀，在高速离心机下有效地分离出沉淀，小心洗涤后再经浓硝酸溶解，用原子吸收法测定铜含量，即可推知样品中维生素C的含量。该法实验仪器较昂贵，主要问题是 *** 作过程中反应完全与否，沉淀物洗涤、离心反复多次，极容易带来误差。该法优点是能不受果蔬自身颜色的干扰，有一定的发展前景。根据试验，发现此法结果偏低，还有待于进一步优化改善。

十六．金纳米微粒分光光度法测定维生素C的方法

本发明公开了一种用金纳米微粒分光光度法测定维生素C的方法。于5mL比色管中，依次加入0．1－2．0mL浓度为95．64μg／mL的HAuCl↓［4］溶液，0．02－0．50mL浓度为1％的柠檬酸三钠溶液，再加入0．001－2．0mL浓度为0．38mg／mL的维生素C溶液，混匀，加二次蒸馏水定容至刻度，再充分混匀，在分光光度计上，于520nm处测定吸收值，同时作空白试验。本发明测定方法简单、快捷，所用仪器价廉，试剂易得

十七  L-半胱氨酸修饰电极测定维生素C的方法

研究了L-半胱氨酸修饰电极的制备方法和其电化学行为，并用于维生素C的测定，发现该电极对VC有明显的电催化作用，在pH=100的NH4Cl-NH3·H2O缓冲溶液中，VC在L-半胱氨酸修饰电极上产生一灵敏的氧化峰，峰电流与VC的浓度在10×10-3~10×10-6mol/L的范围内呈良好的线形关系，相关系数为09962，其最低检测限可达10×10-6mol/L，与紫外光谱法测定的结果一致。

测定维生素C有多种方法，包括采用I2或二氯靛酚（DPI）进行氧化还原滴定。一般来说，滴定法是一种快速、简便、准确的技术，它通过滴定剂和被滴定物质的等当量反应，精确测定被测物质的含量。DPI对于维生素C具有良好的选择性，是一种理想的氧化剂。

十八  梅特勒-托利多仪器法

传统的滴定法是手工滴定，根据指示剂颜色的变化确定终点，通过测量滴定剂的消耗量，计算被测物质的含量。手工滴定有很多不足：手工控制误差较大，计算复杂，针对不同的反应需要特殊指示剂。梅特勒-托利多的自动电位滴定仪解决了这一问题，通过测量滴定反应中电位的变化确定终点，全自动 *** 作、计算，测量快速，结果准确。梅特勒-托利多的滴定仪配有记忆卡包，存储有成熟滴定方法，可方便快速解决实际应用问题，并且稍作改动就能作为新的测定的实验方法。

除此之外，还有双光束剩余染料差减比色法，2_6_二氯靛酚钠动力学分光光度法、聚中性红修饰电极方法、示波溴量法、流动化学发光抑制法、磷钼钨杂多酸作显色剂快速检测方法、溶氧测定装置测定水果蔬菜中抗坏血酸含量的方法等。在此不做介绍。

气象站有自动气象站、自动雨量站、透射式能见度仪、前向散射能见度仪、百叶箱、激光云高仪、传感器等测量工具。

自动气象站：可以通过专业配套的数据采集通讯线与计算机进行连接，将数据传输到气象计算机气象数据库中，用于统计分析和处理。

自动雨量站：自动雨量站是用于测量并记录各种雨量信息的综合观测仪器。

透射式能见度仪：通过测量发射器和接收器之间水平空气柱的平均消光系数而算出能见度。

前向散射能见度仪：发射器与接收器在一定角度和一定距离的两处，接收器接收大气的前向散射光，通过测量散射光强度得出散射系数，从而估算出消光系数。

百叶箱：百叶箱是用来放置测定空气温度和湿度仪器的木箱。

激光云高仪：采用激光束照射云体的方法，测量激光发射到接收间的时间，从而计算云中反射点的距离，通过对时间积分的方式确定云量。

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