WB相关技巧--quantity one软件调节内参

1.跑WB 有时候不想做PCA定量怎么调节内参呢？ 

解答：有老司机认为凭借经验可以用肉眼看出来差异，可是对于新手来说总不能做个几百次才像他们获得经验吧，这时候定量就是急需的内容了，对不对？ 解决方法呢？   一般可以用image J 软件或者quantity one软件进行 *** 作， 原理为 ：image J 是依据灰度值（也就是白色到黑色的颜色变化程度）进行的调节；quantity one是依据密度或者体积（也就是条带的大小）； 结果： quantity one 貌似用体积方法好用一点点。

流程如下：打开quantity one 软件 之后导入图片（tiff文件，之前试跑的条带），

结果为：

使用quantity one 进行蛋白的相对含量分析比较的方法： 

先将DGGE图片用画图软件转成TIF格式，加载进QuantityOne后点工具栏上的LaneTools，找到createlanesinanadjustableframe这个工具。

在DGGE图谱上添加可以看见的每个泳带，添加完了在match下面找到match匹配，匹配好了后在reports找到phylogenetictree就可以进行聚类分析了，里面自己选择不同的聚类分析方法。

蛋白质分析法

主要是通过蛋白质含量测定来计算MT浓度，免疫法是最主要的方法。它尤其适合于微量检测，具有灵敏、特异的特点，灵敏度在pg/ml级，对存在体液中含量甚微的MT具有较好的检测效果。在近些年，先后建立了Western Blotting法、放射性免疫检测法(RIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)。

以上内容参考：百度百科-蛋白质分析法

是的，quantityone和imagej测的灰度值有区别。quantityone使用8位灰度级来测量图像的灰度，它的灰度可以范围从0到255，每一个灰度值都对应了不同的颜色；而imagej使用16位灰度级，它的灰度可以范围从0到65535，比quantityone更加细致，可以更加准确地表示图像的灰度。

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