组织切片常用的染色方法是什么

人组织细胞制成的组织切片本身没有颜色，在显微镜下无法进行识别，为了区别不同的细胞结构，就要对切片进行染色。切片染色方法有很多种，如H1染色法、免疫组化染色法、特殊染色等。一般的石蜡切片采用苏木精-伊红染色方法，苏木精能够使细胞核呈紫蓝色，伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。不同的细胞组织，不同蛋白的着色深浅不一样，使我们能从显微镜下区别不同种类的组织细胞。大多数的疾病都能够依靠H1染色的切片做出正确诊断，有时候H1染色难以确诊，就需要应用其他染色方法来辅助诊断，比如免疫组化染色法及特殊染色的方法等；比如淋巴瘤有很多种类、很多来源，要区分就需要加做免疫组化；比如结核病通常用抗酸染色，对病变组织里面进行染色，如果病变组织里面仍出现红色的结核杆菌，就能够确诊。

特殊染色及酶组织化学染色液是利用冻结或固定的切片，在一定的条件下（具有酶的底物等）全酶进行催化作用，产生一种可见产物，沉淀在酶所在的部位，最终通过显微镜对酶的活性进行定位或定量研究。特殊染色是为了显示与确定组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等，需要分别选用相应的显示这些成分的染色方法进行染色。包括：胶原纤维染色（Masson等）、网状纤维染色、弹力纤维染色、肌肉组织染色（磷钨酸苏木素）、脂肪染色（苏丹III）、糖原染色（PAS）、粘液染色（PAS）等。Masson三色染色：胶原纤维蓝色（苯胺蓝复染）或绿色（亮绿复染），肌纤维、纤维素红色，红细胞呈橘红色。

组织切片染色就是利用染料在组织上给予颜色，使其与组织内或细胞内的某种成分发生作用，经过透明后通过光谱吸收或折射，使其各种细微结构能显现不同的颜色，这样在显微镜下就可以显示出组织细胞的各种成分，广泛应用于组织学、胚胎学、病理学教学与科研。染色原理以HE染色为例，易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性和嗜酸性；而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性。构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。 脱氧核糖核酸两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。

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