（2）要规定一定的反应条件，如时间、温度、pH等，并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定，如温度不得超过规定温度的士1℃，pH应恒定。
（3）配制的底物浓度应准确且足够大，底物液中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中，以防止底物被分解。
（4）标本要新鲜，由于绝大多数酶可因久置而活力降低，标本如无法及时测定，应保存于冰箱中。用血浆时，应考虑到抗凝剂对酶反应的影响。有些酶在血细胞、血小板中的浓度比血清高，为此在采血、分离血清时，应注意防止溶血和白细胞的破裂。
（5）在测定过程中，所用仪器应绝对清洁，不应含有酶的抑制物，如酸、碱、蛋白沉淀剂等。
1、冰水浴研磨与液氮研磨的优缺点
（1）冰水浴研磨：
冰水浴研磨容易出现因温度控制不好而导致的酶失活的现象
冰水浴研磨因为研磨时间长，细胞破碎更加充分，因此研磨效率高
（2）液氮研磨：
当植物样本很难进行冰水浴研磨时可以采用这种方法
液氮研磨由于研磨时间短，因此容易出现细胞破碎不够充分的情况。（因此在进行研磨时可以在研磨成粉末时，再用研磨杵大范围研磨。在吸胀的胚变成接近白色粉末时为止）
在研磨之后注意与提取液混合时使用漩涡振荡器进行振荡。为了防止在振荡过程中温度升高导致酶的失活和蛋白质的分解，可以几组进行切换轮着进行漩涡振荡。（共振荡400s的效果就是可以的）
尽量用差值法记录最终称取的样本的重量
2、使用蛋白质计量酶活性的意义
由于每次研磨样品，无法保证蛋白质的提取效率相同。因此需要用蛋白质浓度计量酶活性
3、蛋白质和酶提取时间
在进行实验时，蛋白质要同时进行提取。（比如都是上午进行提取）
4、用文献数据初步核实测量时是否出现问题
用自己的数据与文献进行比较。在相同的情况下，自己的数据应当与文献的数据差异不大。（如文献数据是个位数的酶活力，如果自己出现小于0或者上千的酶活力，就需要进行复查是否在测量时出现了问题。）
5、酶活体系可能出现的问题以及可能原因
（1）差值过小
对照两组的酶含量都过低
反应体系不适合，无法进行充分反应
（2）差值过大
反应体系太小，即使是活力较低的组别，反应体系也无法承载（因此在进行实验之前，要确定反应体系能否承载自己的反应）
6、测量酶活时的实验步骤顺序
先测量样品的蛋白质浓度，若浓度相近时，才可以进行下一步实验。
在有些对实验更加严格的实验中，要首先确定蛋白质浓度，然后把蛋白质浓度统一后，才能再进行酶活力测量。
（？）稀释蛋白的浓度和稀释酶活的浓度应该是相同的（？）
7、测量时应注意的事项
在检测酶活时应尽量使用相同的体系。
在使用如96孔板进行测量时，应设置空白对照以及测量空白板的数据进行校正。
在使用比色皿用分光光度计进行测量时，注意空白对照组应与测量组使用相同的比色皿以减小误差。
1.反应速度大多数酶促反应是可逆反应，其速度既受底物浓度的影响，也受产物生成量的影响。当底物浓度较高时，在反应的初期，其浓度变化甚微，产物生成量也很少，此时反应速度可看作是恒定的。酶反应动力学中所指速度就是反应的初速度。
2.底物浓度
米氏方程ν=νmax[S]/Km+[S]是反映酶促反应速度与底物浓度关系的方程式，其中Km称米氏常数。
Km值是酶的特征常数之一，只与酶的性质有关，而与酶浓度无关。不同的酶，Km值不同。同一个酶有几种底物时，则对每一种底物各有一特定的Km值，其中Km值最小的底物一般称为该酶的最适底物或天然底物。
综上所述，根据酶的特性及定量原理，测定酶活力时，必须注意以下几点：
（1）酶促反应过程中，只有最初一段时间内反应速度与酶浓度成正比，随着反应时间的延长，反应速度即逐渐降低。
（2）要规定一定的反应条件，如时间、温度、pH等，并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定，如温度不得超过规定温度的士1℃，pH应恒定。
（3）配制的底物浓度应准确且足够大，底物液中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中，以防止底物被分解。
（4）标本要新鲜，由于绝大多数酶可因久置而活力降低，标本如无法及时测定，应保存于冰箱中。用血浆时，应考虑到抗凝剂对酶反应的影响。有些酶在血细胞、血小板中的浓度比血清高，为此在采血、分离血清时，应注意防止溶血和白细胞的破裂。
（5）在测定过程中，所用仪器应绝对清洁，不应含有酶的抑制物，如酸、碱、蛋白沉淀剂等。
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