细胞学堂 | THP-1（人单核细胞白血病）如何诱导分化？

THP-1（人单核细胞白血病）来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，在实验研究中，常常诱导其分化为巨噬细胞和泡沫细胞。

本期普诺赛为大家总结了分化类型及其具体实验操作。

THP-1分化为巨噬细胞

巨噬细胞是重要的免疫效应细胞，在固有免疫和适应性免疫应答中发挥重要作用。同时，它也是高度异质性的细胞，受局部微环境的影响，可活化为不同的类型，展现出不同的表型和功能。由于巨噬细胞在不同的组织环境和生理、病理条件下的异质性， 巨噬细胞被分为两种主要类型：M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞 。

THP-1细胞通常用佛波酯（PMA）诱导分化为巨噬细胞，然后在PMA仍然存在的情况下：

脂多糖(LPS)(100ng/mL)、IFN-γ(20ng/mL)培养48h，诱导其向M1极化；

IL-4(20ng/mL)、IL-13(20ng/mL)培养48h，诱导其向M2极化；

最后，在无刺激物和无PMA的情况下，用无血清RPMI-1640培养基重悬细胞，可保持72h。

图1. 巨噬细胞分化为M1和M2

PMA诱导THP-1步骤：

将处于对数生长期的THP-1细胞离心，用RPMI-1640培养基重悬；

加入PMA，显微镜下细胞计数，调整THP-1细胞密度为5*10^5/mL；

使PMA终浓度为100ng/mL，将细胞种入六孔板，每孔加入细胞2mL；

48h后，显微镜下观察巨噬细胞构建成功。

单核细胞THP-1用PMA诱导后， 由悬浮式生长变成贴壁生长，由圆形变成不规则形态，体积进一步增大，细胞浆疏松，细胞核增大明显，可见大量明显细胞器，胞膜周围可见少量突起 。

图2. THP-1经PMA诱导分化为巨噬细胞

THP-1分化为泡沫细胞

THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞后，可以通过摄取大量脂质转变为泡沫细胞，这也是动脉粥样硬化产生的原因。

将THP-1细胞经PMA诱导为巨噬细胞后，可用RPMI-1640培养基配制氧化修饰低密度脂蛋白OX-LDL ，使其终浓度为80mg/L，加入六孔板中，每孔量为2mL，干预24h。

油红O染色步骤：

单核细胞源性巨噬细胞用OX-LDL诱导24h后, 倒置显微镜下观察， 巨噬细胞体积进一步增大，细胞膜突触形成明显，胞浆增加，疏松化，可见大量细胞器及吞噬的脂质小滴 。油红O染色后，细胞浆内可见大量红染物质。

图3. 巨噬细胞经OX-LDL诱导后用油红O染色

使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时THP-1细胞的电转染条件是：

对于0.2 cm电转杯，细胞密度为10x10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为140V， 电容为950μF。

对于0.4 cm电转杯，细胞密度为10x10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为250μl，电压为250V， 电容为950μF。

可能一样，也可能不一样，得具体问题具体分析。

一、浮力概念

浮力指物体在流体（包括液体和气体）中，各表面受流体（液体和气体）压力的差（合力）。公元前245年，阿基米德发现了浮力原理。浮力的定义式为F浮=G排(即物体浮力等于物体下沉时排开液体的重力)，计算可用它推导出公式F浮=ρ液gV排（ρ液：液体密度，单位千克/立方米；g：重力与质量的比值g=9.8N/kg在粗略计算时，g可以取10N/kg，单位牛顿；V排：排开液体的体积，单位立方米）。液体的浮力也适用于气体。

二、浮力产生的原因

浸在液体或气体里的物体受到液体或气体对物体向上的和向下的压力差。物体在液体中下表面受到的压力大于物体在液体中上表面受到的压力，所以合力为F向上-F向下，原因是液体内部向各个方向都有压强，那么物体上表面受到液体给它的一个向下的压力，而物体下表面受到液体给它的一个向上的压力。由于在同种液体中，深度越大，压强越大，所以物体下表面受到的压力很明显要大于物体上表面受到的压力，所以是F向上-F向下

三、本题目分析

1、物体沉到溶器底部，但没有与容器文化部紧密接触（即物体下部有液体），此时物体底部有受到向上的压力，因而使物体受到浮力。根据阿基米德定律，浮力F浮=ρ液×V排×g，当物体浸没和悬浮时，其V物=V排, 所以两种情况下的浮力都相等（F浮=p液×V物×g）。虽然两者浮力相同，但前者是浮力小于重力，后者是浮力等于重力。

2、当物体和容器底部紧密接触(即物体下部没有液体)时。此时物体没有受到液体向上的压力，即F浮=0，例：正方体，圆柱体等底面平整，接触容器底是下部没液体浮力为0，其余例如球类，不能完全紧密接触时浮力不为0。

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